农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
1期
10-14
,共5页
白宇%童铁钢%刘光亮%肖一红%王群%徐树兰%张维军%吴东来
白宇%童鐵鋼%劉光亮%肖一紅%王群%徐樹蘭%張維軍%吳東來
백우%동철강%류광량%초일홍%왕군%서수란%장유군%오동래
马γ-干扰素%单克隆抗体
馬γ-榦擾素%單剋隆抗體
마γ-간우소%단극륭항체
将原核表达的重组马γ-干扰素成熟蛋白(mEIFN-γ)免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),经4次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以昆虫杆状病毒表达系统获得的重组马γ-干扰素作为检测抗原进行间接ELISA检测,共筛选并最终得到了12株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株.利用间接免疫荧光(IFA)试验对12株单克隆抗体进行鉴定,结果证实所获得的12株细胞分泌的抗体均为针对马γ-干扰素的特异性抗体.单克隆抗体亚型鉴定结果显示,4株为IgG1、2株为IgG2a、3株为IgG2b和3株为IgM,而且所有单克隆抗体的轻链均为κ链.将此12株单克隆抗体分别与用原核系统分节段表达的重组马γ-干扰素GST-mEIFN-γ(1-84)>和GST-mEIFN-γ(80-146)>蛋白进行特异性ELISA检测,结果表明有7株单克隆抗体识别GST-mEIFN-γ(1-84)>,而另5株单克隆抗体与GST-mEIFN-γ(80-146)>发生反应,说明所获得的12株单克隆抗体至少针对2个或2个以上不同的抗原表位.
將原覈錶達的重組馬γ-榦擾素成熟蛋白(mEIFN-γ)免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),經4次免疫後,取脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融閤,以昆蟲桿狀病毒錶達繫統穫得的重組馬γ-榦擾素作為檢測抗原進行間接ELISA檢測,共篩選併最終得到瞭12株能穩定分泌抗體的單細胞剋隆株.利用間接免疫熒光(IFA)試驗對12株單剋隆抗體進行鑒定,結果證實所穫得的12株細胞分泌的抗體均為針對馬γ-榦擾素的特異性抗體.單剋隆抗體亞型鑒定結果顯示,4株為IgG1、2株為IgG2a、3株為IgG2b和3株為IgM,而且所有單剋隆抗體的輕鏈均為κ鏈.將此12株單剋隆抗體分彆與用原覈繫統分節段錶達的重組馬γ-榦擾素GST-mEIFN-γ(1-84)>和GST-mEIFN-γ(80-146)>蛋白進行特異性ELISA檢測,結果錶明有7株單剋隆抗體識彆GST-mEIFN-γ(1-84)>,而另5株單剋隆抗體與GST-mEIFN-γ(80-146)>髮生反應,說明所穫得的12株單剋隆抗體至少針對2箇或2箇以上不同的抗原錶位.
장원핵표체적중조마γ-간우소성숙단백(mEIFN-γ)면역BALB/c소서(Mus musculus),경4차면역후,취비세포여SP2/0골수류세포진행융합,이곤충간상병독표체계통획득적중조마γ-간우소작위검측항원진행간접ELISA검측,공사선병최종득도료12주능은정분비항체적단세포극륭주.이용간접면역형광(IFA)시험대12주단극륭항체진행감정,결과증실소획득적12주세포분비적항체균위침대마γ-간우소적특이성항체.단극륭항체아형감정결과현시,4주위IgG1、2주위IgG2a、3주위IgG2b화3주위IgM,이차소유단극륭항체적경련균위κ련.장차12주단극륭항체분별여용원핵계통분절단표체적중조마γ-간우소GST-mEIFN-γ(1-84)>화GST-mEIFN-γ(80-146)>단백진행특이성ELISA검측,결과표명유7주단극륭항체식별GST-mEIFN-γ(1-84)>,이령5주단극륭항체여GST-mEIFN-γ(80-146)>발생반응,설명소획득적12주단극륭항체지소침대2개혹2개이상불동적항원표위.
