中国酿造
中國釀造
중국양조
CHINA BREWING
2009年
3期
20-24
,共5页
曹罗元%叶冰莹%张积森%陈由强%陈如凯
曹囉元%葉冰瑩%張積森%陳由彊%陳如凱
조라원%협빙형%장적삼%진유강%진여개
酿酒酵母%乙醛脱氧酶%ALD4%基因删除
釀酒酵母%乙醛脫氧酶%ALD4%基因刪除
양주효모%을철탈양매%ALD4%기인산제
设计与酿酒酵母编码乙脱醛氢酶ALD4因ORF两侧序列同源的删除组件引物,以质粒pUG6为模板进行PCR构建带有Kanr选择标记的删除组件.通过醋酸锂转化法将删除组件导入酿酒酵母菌,采用G418筛选阳性克隆子,将质粒pSH65转入阳性克隆子.半乳精诱导pSH65表达Cre酶切除Kanr基因,在ALD4基因ORF处留下1个loxP位点,通过2次的转化筛选验证获得ALD4双倍体基因缺陷型突变株Y01-ALD4.
設計與釀酒酵母編碼乙脫醛氫酶ALD4因ORF兩側序列同源的刪除組件引物,以質粒pUG6為模闆進行PCR構建帶有Kanr選擇標記的刪除組件.通過醋痠鋰轉化法將刪除組件導入釀酒酵母菌,採用G418篩選暘性剋隆子,將質粒pSH65轉入暘性剋隆子.半乳精誘導pSH65錶達Cre酶切除Kanr基因,在ALD4基因ORF處留下1箇loxP位點,通過2次的轉化篩選驗證穫得ALD4雙倍體基因缺陷型突變株Y01-ALD4.
설계여양주효모편마을탈철경매ALD4인ORF량측서렬동원적산제조건인물,이질립pUG6위모판진행PCR구건대유Kanr선택표기적산제조건.통과작산리전화법장산제조건도입양주효모균,채용G418사선양성극륭자,장질립pSH65전입양성극륭자.반유정유도pSH65표체Cre매절제Kanr기인,재ALD4기인ORF처류하1개loxP위점,통과2차적전화사선험증획득ALD4쌍배체기인결함형돌변주Y01-ALD4.
