CAJ | 학술논문

目的构建重组人肿瘤抑素分泌型真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达.方法以人胚肾293细胞为材料,提取总RNA,用RT-PCR方法合成人tumstatin cDNA,将该cDNA克隆到pGEM-T载体获得重组质粒pGEM-T/tumstatin.以pGEM-T/tumstatin为模板扩增含Ⅳ型胶原信号肽sig基因的sig-tumstatin基因片段,sig-tumstatin 片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定对获得的sig-tum-statin基因片段及重组载体进行验证.将重组sig-tumstatin 真核表达载体转染到CHO-K1对其表达状况进行检测.结果所获得的sig-tumstatin片段(822 bp)序列与报道的序列完全一致.酶切鉴定的结果表明含重组人肿瘤抑素的pIRESneo3/sig-tumstatin表达载体构建成功.转染重组pIRESneo3/sig-tumstatin的CHO-K1分泌表达了重组人tum-statin.另外,从生长曲线结果来看,转染了 pIRESneo3/sig-tumstatin真核表达载体和空载体的CHO-K1比未转染的CHO-K1细胞的生长速度要慢一些.结论成功地构建了重组人tumstatin分泌型真核表达载体并获得能稳定表达tumstatin的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础.
목적 구건중조인종류억소분비형진핵표체재체병검측기재중국창서란소세포중적은정표체.방법 이인배신293세포위재료,제취총RNA,용RT-PCR방법합성인tumstatin cDNA,장해cDNA극륭도pGEM-T재체획득중조질립pGEM-T/tumstatin.이pGEM-T/tumstatin위모판확증함Ⅳ형효원신호태sig기인적sig-tumstatin기인편단,sig-tumstatin 편단경매절후,삽입경동양매절적pIRESneo3질립,이용극륭PCR、한제성내절매소화이급서렬측정대획득적sig-tum-statin기인편단급중조재체진행험증.장중조sig-tumstatin 진핵표체재체전염도CHO-K1대기표체상황진행검측.결과 소획득적sig-tumstatin편단(822 bp)서렬여보도적서렬완전일치.매절감정적결과표명함중조인종류억소적pIRESneo3/sig-tumstatin표체재체구건성공.전염중조pIRESneo3/sig-tumstatin적CHO-K1분비표체료중조인tum-statin.령외,종생장곡선결과래간,전염료 pIRESneo3/sig-tumstatin진핵표체재체화공재체적CHO-K1비미전염적CHO-K1세포적생장속도요만일사.결론 성공지구건료중조인tumstatin분비형진핵표체재체병획득능은정표체tumstatin적CHO-K1,위개전하일보적실험전정료기출.