CAJ | 학술논문

目的:探讨人诱导性多能干细胞(iPS细胞)体外定向分化为神经干细胞(NSCs)的方法.方法:人iPS细胞悬浮培养4 d形成的拟胚体(EB)经维甲酸(RA)诱导4 d,诱导后的EB在无血清培养基中筛选并扩增培养.倒置显微镜下观察诱导后细胞的形态变化,RT-PCR检测iPS细胞多能性基因Nanog、Oct4和Sox2的表达,免疫荧光法检测NSCs特异性标志物Nestin、神经元标志物β-tubulinⅢ和神经胶质细胞标志物GFAP的表达.结果:(1)人iPS细胞在饲养层细胞上稳定传代,表达多能性基因Nanog、Oct4和Sox2,去除饲养层后悬浮培养能形成球形EB;(2)经RA诱导后的EB在无血清培养基中筛选培养第1 d贴壁生长,周围爬出细胞;第3 d,在高倍镜下可见中央聚集的细胞呈环形的rosette结构,rosette结构增多到第7 d达高峰.对照组未观察到rosette结构.随后大部分rosette细胞脱离瓶壁悬浮生长,形成神经球样克隆.免疫荧光显示神经球呈nestin阳性表达.贴壁培养的神经球能分化成β-tubulin Ⅲ和GFAP阳性细胞.结论:RA诱导结合无血清培养基筛选法能诱导iPS细胞高效分化为NSCs.
목적:탐토인유도성다능간세포(iPS세포)체외정향분화위신경간세포(NSCs)적방법.방법:인iPS세포현부배양4 d형성적의배체(EB)경유갑산(RA)유도4 d,유도후적EB재무혈청배양기중사선병확증배양.도치현미경하관찰유도후세포적형태변화,RT-PCR검측iPS세포다능성기인Nanog、Oct4화Sox2적표체,면역형광법검측NSCs특이성표지물Nestin、신경원표지물β-tubulinⅢ화신경효질세포표지물GFAP적표체.결과:(1)인iPS세포재사양층세포상은정전대,표체다능성기인Nanog、Oct4화Sox2,거제사양층후현부배양능형성구형EB;(2)경RA유도후적EB재무혈청배양기중사선배양제1 d첩벽생장,주위파출세포;제3 d,재고배경하가견중앙취집적세포정배형적rosette결구,rosette결구증다도제7 d체고봉.대조조미관찰도rosette결구.수후대부분rosette세포탈리병벽현부생장,형성신경구양극륭.면역형광현시신경구정nestin양성표체.첩벽배양적신경구능분화성β-tubulin Ⅲ화GFAP양성세포.결론:RA유도결합무혈청배양기사선법능유도iPS세포고효분화위NSCs.