分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2011年
9期
1442-1446
,共5页
董莲华%盛灵慧%王晶%黎朋
董蓮華%盛靈慧%王晶%黎朋
동련화%성령혜%왕정%려붕
质粒%超声波破碎%高效液相色谱%荧光%聚合酶链式反应
質粒%超聲波破碎%高效液相色譜%熒光%聚閤酶鏈式反應
질립%초성파파쇄%고효액상색보%형광%취합매련식반응
采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质.采用超声波破碎(功率300 W,频率24 kHz)技术将质粒DNA破碎成200～500 bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸(dCMP:3.2 min；dTMP:4.7 min; dGMP:5.3 min,dAMP:6.8 min),将产物通过HPLC分离后,采用外标法进行定量分析.应用此方法对待测质粒pNK603进行定量分析,测定的4种核苷酸的摩尔百分比(A∶T= 0.95,C∶G=0.98)与理论值接近.本方法的测定结果(47.24 μg/g)与实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR,45.98 μg/g)和PicoGreen荧光染料法(46.02 μg/g)的测定结果没有显著差异,表明建立的超声波-HPLC方法可以应用于质粒DNA的定量分析.
採用超聲波破碎結閤高效液相色譜技術,建立瞭定量檢測質粒DNA的方法,測量結果可以溯源至覈苷痠標準物質.採用超聲波破碎(功率300 W,頻率24 kHz)技術將質粒DNA破碎成200～500 bp的小片段DNA,再用蛇毒燐痠二酯酶將其水解為4種覈苷痠(dCMP:3.2 min；dTMP:4.7 min; dGMP:5.3 min,dAMP:6.8 min),將產物通過HPLC分離後,採用外標法進行定量分析.應用此方法對待測質粒pNK603進行定量分析,測定的4種覈苷痠的摩爾百分比(A∶T= 0.95,C∶G=0.98)與理論值接近.本方法的測定結果(47.24 μg/g)與實時熒光定量聚閤酶鏈式反應(PCR,45.98 μg/g)和PicoGreen熒光染料法(46.02 μg/g)的測定結果沒有顯著差異,錶明建立的超聲波-HPLC方法可以應用于質粒DNA的定量分析.
채용초성파파쇄결합고효액상색보기술,건립료정량검측질립DNA적방법,측량결과가이소원지핵감산표준물질.채용초성파파쇄(공솔300 W,빈솔24 kHz)기술장질립DNA파쇄성200～500 bp적소편단DNA,재용사독린산이지매장기수해위4충핵감산(dCMP:3.2 min；dTMP:4.7 min; dGMP:5.3 min,dAMP:6.8 min),장산물통과HPLC분리후,채용외표법진행정량분석.응용차방법대대측질립pNK603진행정량분석,측정적4충핵감산적마이백분비(A∶T= 0.95,C∶G=0.98)여이론치접근.본방법적측정결과(47.24 μg/g)여실시형광정량취합매련식반응(PCR,45.98 μg/g)화PicoGreen형광염료법(46.02 μg/g)적측정결과몰유현저차이,표명건립적초성파-HPLC방법가이응용우질립DNA적정량분석.
