肿瘤药学
腫瘤藥學
종류약학
ANTI-TUMOR PHARMACY
2011年
1期
16-21
,共6页
宋婕%刘艳红%李亚林%汪砥
宋婕%劉豔紅%李亞林%汪砥
송첩%류염홍%리아림%왕지
肝细胞癌%原核表达%HTA%多克隆抗体
肝細胞癌%原覈錶達%HTA%多剋隆抗體
간세포암%원핵표체%HTA%다극륭항체
目的 将肝癌相关基因HTA进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其作为肝癌导向治疗靶点的可行性及临床意义奠定基础.方法 应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到HTA338-616cDNA,再将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-MBP内,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3) 中表达.His-tag 磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白MBP-HTA,通过Western blot 和ELISA 方法检测重组蛋白的抗原性.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c 小鼠制备多克隆抗体,并采用ELISA、Westernblot 和免疫组化的方法检测抗体的灵敏度和特异性.结果 成功地构建了表达MBP-HTA 融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-MBP-HTA.重组MBP-HTA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以包涵体的形式存在.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化和Western blot分析,得到了分子量约为52kDa的目的 蛋白.获得了高效价的特异性多克隆抗体,经ELISA检测抗体的效价为1∶3200,用Western blot检测的效价为1∶400.免疫组织化学检测表明:肝癌组织中HTA 蛋白的阳性表达率明显高于正常肝组织(P <0.01).结论 成功地制备出抗MBP-HTA多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性;能用于免疫组织化学的检测,且HTA在肝癌组织中的阳性表达率明显高于正常肝组织.HTA蛋白有望成为肝癌导向治疗的潜在靶点.
目的 將肝癌相關基因HTA進行剋隆、錶達併製備多剋隆抗體,為進一步研究其作為肝癌導嚮治療靶點的可行性及臨床意義奠定基礎.方法 應用RT-PCR技術,從人肝癌細胞繫HepG2細胞中擴增得到HTA338-616cDNA,再將其剋隆到原覈錶達載體pET21a(+)-MBP內,用IPTG誘導其在大腸桿菌BL21(DE3) 中錶達.His-tag 磁珠純化試劑盒純化重組蛋白MBP-HTA,通過Western blot 和ELISA 方法檢測重組蛋白的抗原性.將純化的重組蛋白免疫BALB/c 小鼠製備多剋隆抗體,併採用ELISA、Westernblot 和免疫組化的方法檢測抗體的靈敏度和特異性.結果 成功地構建瞭錶達MBP-HTA 融閤蛋白的原覈錶達質粒pET21a(+)-MBP-HTA.重組MBP-HTA融閤蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)內得以高效錶達,且以包涵體的形式存在.His-tag磁珠純化試劑盒純化和Western blot分析,得到瞭分子量約為52kDa的目的 蛋白.穫得瞭高效價的特異性多剋隆抗體,經ELISA檢測抗體的效價為1∶3200,用Western blot檢測的效價為1∶400.免疫組織化學檢測錶明:肝癌組織中HTA 蛋白的暘性錶達率明顯高于正常肝組織(P <0.01).結論 成功地製備齣抗MBP-HTA多剋隆抗體,該抗體有較高的效價和特異性;能用于免疫組織化學的檢測,且HTA在肝癌組織中的暘性錶達率明顯高于正常肝組織.HTA蛋白有望成為肝癌導嚮治療的潛在靶點.
목적 장간암상관기인HTA진행극륭、표체병제비다극륭항체,위진일보연구기작위간암도향치료파점적가행성급림상의의전정기출.방법 응용RT-PCR기술,종인간암세포계HepG2세포중확증득도HTA338-616cDNA,재장기극륭도원핵표체재체pET21a(+)-MBP내,용IPTG유도기재대장간균BL21(DE3) 중표체.His-tag 자주순화시제합순화중조단백MBP-HTA,통과Western blot 화ELISA 방법검측중조단백적항원성.장순화적중조단백면역BALB/c 소서제비다극륭항체,병채용ELISA、Westernblot 화면역조화적방법검측항체적령민도화특이성.결과 성공지구건료표체MBP-HTA 융합단백적원핵표체질립pET21a(+)-MBP-HTA.중조MBP-HTA융합단백재대장간균BL21(DE3)내득이고효표체,차이포함체적형식존재.His-tag자주순화시제합순화화Western blot분석,득도료분자량약위52kDa적목적 단백.획득료고효개적특이성다극륭항체,경ELISA검측항체적효개위1∶3200,용Western blot검측적효개위1∶400.면역조직화학검측표명:간암조직중HTA 단백적양성표체솔명현고우정상간조직(P <0.01).결론 성공지제비출항MBP-HTA다극륭항체,해항체유교고적효개화특이성;능용우면역조직화학적검측,차HTA재간암조직중적양성표체솔명현고우정상간조직.HTA단백유망성위간암도향치료적잠재파점.
