中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
9期
947-950
,共4页
赵焕阁%王华%黄用豪%周松林%郭峻莉%黄凤迎%林映莹%谭光宏
趙煥閣%王華%黃用豪%週鬆林%郭峻莉%黃鳳迎%林映瑩%譚光宏
조환각%왕화%황용호%주송림%곽준리%황봉영%림영형%담광굉
弓形虫%ROP5%真核表达质粒%免疫保护
弓形蟲%ROP5%真覈錶達質粒%免疫保護
궁형충%ROP5%진핵표체질립%면역보호
目的 构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应.方法 克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定.将45只小鼠随机均分为3组,分别为PBS组、空质粒组、pcDNA3.1-ROP5组,每2 w肌注免疫(100 μg/只)1次,共3次,于免疫前及每次免疫前1 d和末次免疫后2 w收集小鼠血清,用间接ELISA法检测血清抗弓形虫的IgG.各组小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子1 000个/每鼠,观察小鼠受攻击感染后的存活时间.结果 真核表达载体构建成功,Western blotting分析结果显示,重组质粒pcDNA3.1-ROP5能在Hela细胞表达,蛋白相对分子质量为61 kDa.pcDNA3.1-ROP5末次免疫后血清中IgG水平显著高于其他组,pcDNA-ROP5免疫的小鼠与对照组相比,实验组小鼠产生了明显的体液免疫应答.攻击感染试验中,实验组的小鼠比对照组的存活时间有明显延长.结论 构建的真核表达重组质粒pcDNA-ROP5对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性.
目的 構建弓形蟲pcDNA-ROP5真覈錶達載體,觀察弓形蟲ROP5基因在小鼠體內誘導的免疫反應.方法 剋隆弓形蟲ROP5基因,將其插入真覈錶達載體pcDNA-3.1中構建重組質粒pcDNA-ROP5,脂質體法轉染Hela細胞體外錶達蛋白,蛋白質印跡(Western blotting)分析鑒定.將45隻小鼠隨機均分為3組,分彆為PBS組、空質粒組、pcDNA3.1-ROP5組,每2 w肌註免疫(100 μg/隻)1次,共3次,于免疫前及每次免疫前1 d和末次免疫後2 w收集小鼠血清,用間接ELISA法檢測血清抗弓形蟲的IgG.各組小鼠腹腔註射RH株弓形蟲速殖子1 000箇/每鼠,觀察小鼠受攻擊感染後的存活時間.結果 真覈錶達載體構建成功,Western blotting分析結果顯示,重組質粒pcDNA3.1-ROP5能在Hela細胞錶達,蛋白相對分子質量為61 kDa.pcDNA3.1-ROP5末次免疫後血清中IgG水平顯著高于其他組,pcDNA-ROP5免疫的小鼠與對照組相比,實驗組小鼠產生瞭明顯的體液免疫應答.攻擊感染試驗中,實驗組的小鼠比對照組的存活時間有明顯延長.結論 構建的真覈錶達重組質粒pcDNA-ROP5對抗擊弓形蟲攻擊感染能夠激髮一定的免疫保護性.
목적 구건궁형충pcDNA-ROP5진핵표체재체,관찰궁형충ROP5기인재소서체내유도적면역반응.방법 극륭궁형충ROP5기인,장기삽입진핵표체재체pcDNA-3.1중구건중조질립pcDNA-ROP5,지질체법전염Hela세포체외표체단백,단백질인적(Western blotting)분석감정.장45지소서수궤균분위3조,분별위PBS조、공질립조、pcDNA3.1-ROP5조,매2 w기주면역(100 μg/지)1차,공3차,우면역전급매차면역전1 d화말차면역후2 w수집소서혈청,용간접ELISA법검측혈청항궁형충적IgG.각조소서복강주사RH주궁형충속식자1 000개/매서,관찰소서수공격감염후적존활시간.결과 진핵표체재체구건성공,Western blotting분석결과현시,중조질립pcDNA3.1-ROP5능재Hela세포표체,단백상대분자질량위61 kDa.pcDNA3.1-ROP5말차면역후혈청중IgG수평현저고우기타조,pcDNA-ROP5면역적소서여대조조상비,실험조소서산생료명현적체액면역응답.공격감염시험중,실험조적소서비대조조적존활시간유명현연장.결론 구건적진핵표체중조질립pcDNA-ROP5대항격궁형충공격감염능구격발일정적면역보호성.
