中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2005年
2期
81-84
,共4页
张爱华%彭夫望%闭兰%张智%王志友%史良如
張愛華%彭伕望%閉蘭%張智%王誌友%史良如
장애화%팽부망%폐란%장지%왕지우%사량여
CD71%单克隆抗体%单链抗体%序列%表达%鉴定
CD71%單剋隆抗體%單鏈抗體%序列%錶達%鑒定
CD71%단극륭항체%단련항체%서렬%표체%감정
目的利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体.方法从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用Oligod T为逆转录引物,逆转录合成eDNA第一链,然后分别采用VL和VH框架区的PCR引物,扩增VH(重链可变区)和VL(轻链可变区)DNA片段,利用事先合成的存在于VL下游引物和VH上游引物的部分人工连接子重叠互补序列,将VL和VH的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE),形成单链抗体基因.最后将此基因重组进表达载体pBAD/gⅢ/C中,经L-arabinose(左旋阿拉伯糖)诱导表达并初步鉴定.结果构建出700bp左右的单链基因,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白分子.结论经因特网查询表明,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区Ⅰ A亚组;轻链属于小鼠k轻链可变区Ⅱ亚组,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性.本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础.
目的利用基因工程技術將鼠源性單剋隆抗體WuT9改造成單鏈抗體.方法從分泌抗CD71單剋隆抗體的雜交瘤細胞WuT9中提取總RNA,採用Oligod T為逆轉錄引物,逆轉錄閤成eDNA第一鏈,然後分彆採用VL和VH框架區的PCR引物,擴增VH(重鏈可變區)和VL(輕鏈可變區)DNA片段,利用事先閤成的存在于VL下遊引物和VH上遊引物的部分人工連接子重疊互補序列,將VL和VH的PCR迴收產物進行部分重疊PCR(SOE),形成單鏈抗體基因.最後將此基因重組進錶達載體pBAD/gⅢ/C中,經L-arabinose(左鏇阿拉伯糖)誘導錶達併初步鑒定.結果構建齣700bp左右的單鏈基因,併穫得暘性重組錶達載體剋隆,錶達產物為相對分子質量27000左右的蛋白分子.結論經因特網查詢錶明,單鏈抗體基因重鏈部分屬于小鼠H鏈可變區Ⅰ A亞組;輕鏈屬于小鼠k輕鏈可變區Ⅱ亞組,此單鏈抗體基因的錶達產物具有一定的特異結閤活性.本研究為抗CD71單鏈抗體的臨床應用打下瞭基礎.
목적이용기인공정기술장서원성단극륭항체WuT9개조성단련항체.방법종분비항CD71단극륭항체적잡교류세포WuT9중제취총RNA,채용Oligod T위역전록인물,역전록합성eDNA제일련,연후분별채용VL화VH광가구적PCR인물,확증VH(중련가변구)화VL(경련가변구)DNA편단,이용사선합성적존재우VL하유인물화VH상유인물적부분인공련접자중첩호보서렬,장VL화VH적PCR회수산물진행부분중첩PCR(SOE),형성단련항체기인.최후장차기인중조진표체재체pBAD/gⅢ/C중,경L-arabinose(좌선아랍백당)유도표체병초보감정.결과구건출700bp좌우적단련기인,병획득양성중조표체재체극륭,표체산물위상대분자질량27000좌우적단백분자.결론경인특망사순표명,단련항체기인중련부분속우소서H련가변구Ⅰ A아조;경련속우소서k경련가변구Ⅱ아조,차단련항체기인적표체산물구유일정적특이결합활성.본연구위항CD71단련항체적림상응용타하료기출.
