生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2008年
6期
836-839
,共4页
曹鸿国%卢智刚%罗敏%袁克湖%邓宏魁
曹鴻國%盧智剛%囉敏%袁剋湖%鄧宏魁
조홍국%로지강%라민%원극호%산굉괴
慢病毒载体%绿色荧光蛋白%青色荧光蛋白%点突变
慢病毒載體%綠色熒光蛋白%青色熒光蛋白%點突變
만병독재체%록색형광단백%청색형광단백%점돌변
目的:通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白(ECFP)慢病毒表达载体.方法与结果:根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基因片段,将其与载体连接,得到ECFP慢病毒表达载体pLentiLox3.7-ECFP,测序结果证实经过多点突变扩增的ECFP片段基因序列完全正确;磷酸钙介导pLentiLox3.7-ECFP在293T细胞中表达,48 h后在荧光显微镜下观察到青色荧光蛋白.结论:通过多点突变的方法得到了ECFP慢病毒表达载体.
目的:通過多點突變構建增彊型青色熒光蛋白(ECFP)慢病毒錶達載體.方法與結果:根據增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)和ECFP基因序列的差異設計3對引物,以pLentiLox3.7-EGFP為模闆進行分段PCR擴增,再以分段PCR擴增產物為模闆擴增齣突變的ECFP基因片段,將其與載體連接,得到ECFP慢病毒錶達載體pLentiLox3.7-ECFP,測序結果證實經過多點突變擴增的ECFP片段基因序列完全正確;燐痠鈣介導pLentiLox3.7-ECFP在293T細胞中錶達,48 h後在熒光顯微鏡下觀察到青色熒光蛋白.結論:通過多點突變的方法得到瞭ECFP慢病毒錶達載體.
목적:통과다점돌변구건증강형청색형광단백(ECFP)만병독표체재체.방법여결과:근거증강형록색형광단백(EGFP)화ECFP기인서렬적차이설계3대인물,이pLentiLox3.7-EGFP위모판진행분단PCR확증,재이분단PCR확증산물위모판확증출돌변적ECFP기인편단,장기여재체련접,득도ECFP만병독표체재체pLentiLox3.7-ECFP,측서결과증실경과다점돌변확증적ECFP편단기인서렬완전정학;린산개개도pLentiLox3.7-ECFP재293T세포중표체,48 h후재형광현미경하관찰도청색형광단백.결론:통과다점돌변적방법득도료ECFP만병독표체재체.
