CAJ | 학술논문

依照猪IFN-γ基因序列设计引物,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a,构建pET-30a-pIFN-γ重组表达载体,转化入寄主菌BL21(DE3),经PCR、双酶切、测序鉴定正确后,用IPTG进行诱导表达,可溶性的表达产物分别经镍柱和Sephadex-G100纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化,然后进行SDS-PAGE、Western-blot分析,并用细胞病变抑制法进行重组猪IFN-γ活性测定.结果表明:试验得到了高纯度的重组pIFN-γ,且纯化的重组猪IFN-γ蛋白具有较高的干扰病毒复制的活性,对PRV的活性为2.0×103 U*mg-1,而对标准O型口蹄疫病毒的活性为2.56×105 U*mg-1.
의조저IFN-γ기인서렬설계인물,장해기인극륭지원핵표체재체pET-30a,구건pET-30a-pIFN-γ중조표체재체,전화입기주균BL21(DE3),경PCR、쌍매절、측서감정정학후,용IPTG진행유도표체,가용성적표체산물분별경얼주화Sephadex-G100순화;포함체경DOC세조、SKL변성용해、투석복성진행순화,연후진행SDS-PAGE、Western-blot분석,병용세포병변억제법진행중조저IFN-γ활성측정.결과표명:시험득도료고순도적중조pIFN-γ,차순화적중조저IFN-γ단백구유교고적간우병독복제적활성,대PRV적활성위2.0×103 U*mg-1,이대표준O형구제역병독적활성위2.56×105 U*mg-1.