CAJ | 학술논문

[目的]构建针对E2F3基因的shRNA表达载体,通过脂质体进行膀胱癌细胞内转染.监测转染效率.[方法]通过软件设计针对E2F3基因的寡核苷酸链,化学合成-对编码短发夹RNA序列,长度为64个碱基.核苷酸链经退火,克隆到经BamHI、HindⅢ双酶切的pRNAT-U6.1/Neo载体上,构建针对E2F3基因的RNA干扰质粒.通过双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建效果.通过不同浓度的Lipofectamin 2000及干扰质粒混合物进行膀胱癌细胞系5637细胞转染,通过绿色荧光的表达程度摸索出细胞最佳转染浓度及转染时间.[结果]重组构建的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo载体经PCR分析及插入基因片段序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致.Lipofectamin 2000能够有效的进行pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo质粒的转染.[结论]载体的成功构建及膀胱癌细胞系的高效转染,为进一步研究E2F3基因在膀胱肿瘤中的功能奠定基础.
[목적]구건침대E2F3기인적shRNA표체재체,통과지질체진행방광암세포내전염.감측전염효솔.[방법]통과연건설계침대E2F3기인적과핵감산련,화학합성-대편마단발협RNA서렬,장도위64개감기.핵감산련경퇴화,극륭도경BamHI、HindⅢ쌍매절적pRNAT-U6.1/Neo재체상,구건침대E2F3기인적RNA간우질립.통과쌍매절、PCR감정급기인편단서렬분석험증구건효과.통과불동농도적Lipofectamin 2000급간우질립혼합물진행방광암세포계5637세포전염,통과록색형광적표체정도모색출세포최가전염농도급전염시간.[결과]중조구건적pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo재체경PCR분석급삽입기인편단서렬분석,결과표명64개감기성공삽입도예계위점,병차서렬완전일치.Lipofectamin 2000능구유효적진행pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo질립적전염.[결론]재체적성공구건급방광암세포계적고효전염,위진일보연구E2F3기인재방광종류중적공능전정기출.