听力学及言语疾病杂志
聽力學及言語疾病雜誌
은역학급언어질병잡지
JOURNAL OF AUDIOLOGY AND SPEECH PATHOLOGY
2010年
3期
249-253
,共5页
连接蛋白26(CX26)%突变体%表达%间隙连接
連接蛋白26(CX26)%突變體%錶達%間隙連接
련접단백26(CX26)%돌변체%표체%간극련접
目的 探讨 CX26蛋白质的9个结构域上的不同错义突变体在细胞内的表达及功能改变的异同,初步研究CX26不同错义突变体的致聋机理.方法 在CX26的9个结构域中各选择1个致聋的错义突变(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),应用重叠区扩增基因拼接法和长引物快速法,构建成与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的载体,野生型CX26-EGFP作对照,脂质体转染HeLa细胞,Western blot分析蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察各突变体在细胞膜上有无间隙连接斑形成.结果CX26的9个结构域上的各1个错义突变体在HeLa细胞中均有表达,其中p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.vRl65W突变体能在细胞膜上表达并形成间隙连接斑,p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体在细胞浆中表达,在细胞膜无表达,无间隙连接斑形成.结论 CX26的p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.R165W突变体在细胞内能被转运到细胞膜并形成间隙连接,而p.R32H,p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体失去被转运到细胞膜的功能,不能形成间隙连接.CX26的不同错义突变的致聋机制可能不同,与突变点所在的结构域可能没有相关性.
目的 探討 CX26蛋白質的9箇結構域上的不同錯義突變體在細胞內的錶達及功能改變的異同,初步研究CX26不同錯義突變體的緻聾機理.方法 在CX26的9箇結構域中各選擇1箇緻聾的錯義突變(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),應用重疊區擴增基因拼接法和長引物快速法,構建成與增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)融閤錶達的載體,野生型CX26-EGFP作對照,脂質體轉染HeLa細胞,Western blot分析蛋白的錶達,共聚焦顯微鏡下觀察各突變體在細胞膜上有無間隙連接斑形成.結果CX26的9箇結構域上的各1箇錯義突變體在HeLa細胞中均有錶達,其中p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.vRl65W突變體能在細胞膜上錶達併形成間隙連接斑,p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突變體在細胞漿中錶達,在細胞膜無錶達,無間隙連接斑形成.結論 CX26的p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.R165W突變體在細胞內能被轉運到細胞膜併形成間隙連接,而p.R32H,p.R143W、p.S199F和p.L214P突變體失去被轉運到細胞膜的功能,不能形成間隙連接.CX26的不同錯義突變的緻聾機製可能不同,與突變點所在的結構域可能沒有相關性.
목적 탐토 CX26단백질적9개결구역상적불동착의돌변체재세포내적표체급공능개변적이동,초보연구CX26불동착의돌변체적치롱궤리.방법 재CX26적9개결구역중각선택1개치롱적착의돌변(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),응용중첩구확증기인병접법화장인물쾌속법,구건성여증강형록색형광단백(EGFP)융합표체적재체,야생형CX26-EGFP작대조,지질체전염HeLa세포,Western blot분석단백적표체,공취초현미경하관찰각돌변체재세포막상유무간극련접반형성.결과CX26적9개결구역상적각1개착의돌변체재HeLa세포중균유표체,기중p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M화p.vRl65W돌변체능재세포막상표체병형성간극련접반,p.R32H、p.R143W、p.S199F화p.L214P돌변체재세포장중표체,재세포막무표체,무간극련접반형성.결론 CX26적p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M화p.R165W돌변체재세포내능피전운도세포막병형성간극련접,이p.R32H,p.R143W、p.S199F화p.L214P돌변체실거피전운도세포막적공능,불능형성간극련접.CX26적불동착의돌변적치롱궤제가능불동,여돌변점소재적결구역가능몰유상관성.
