福建农林大学学报（自然科学版）
福建農林大學學報（自然科學版）
복건농림대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURE AND FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2011年
2期
151-155
,共5页
范国成%高芳銮%黄美英%谢荔岩%吴祖建%林奇英%谢联辉
範國成%高芳鑾%黃美英%謝荔巖%吳祖建%林奇英%謝聯輝
범국성%고방란%황미영%사려암%오조건%림기영%사련휘
水稻瘤矮病毒%外层衣壳蛋白%内层衣壳蛋白%杆状病毒表达系统%Sf9昆虫细胞
水稻瘤矮病毒%外層衣殼蛋白%內層衣殼蛋白%桿狀病毒錶達繫統%Sf9昆蟲細胞
수도류왜병독%외층의각단백%내층의각단백%간상병독표체계통%Sf9곤충세포
为构建携带水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要内层衣壳蛋白S3基因和外层衣壳蛋白S8基因的重组杆状病毒,将目的基因(S3和S8)分别亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual多角体启动子(PH)和p10启动子的下游.经酶切和确证性序列测定,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组杆粒rbpFBDS3-S8,采用脂质体转染法,将rbpFBDS3-S8转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞包装病毒,PCR筛选鉴定重组病毒.结果表明:Sf9昆虫细胞被侵染72 h后,倒置显微镜下观察到细胞增大,培养液和细胞内出现颗粒状物质,部分细胞破裂甚至裂解,说明S3和S8基因已整合到重组杆状病毒基因组中,这为开展RGDV主要结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其功能研究奠定了基础.
為構建攜帶水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要內層衣殼蛋白S3基因和外層衣殼蛋白S8基因的重組桿狀病毒,將目的基因(S3和S8)分彆亞剋隆到桿狀病毒轉移載體pFastBacDual多角體啟動子(PH)和p10啟動子的下遊.經酶切和確證性序列測定,將其轉化到DH10Bac感受態細胞中,穫得重組桿粒rbpFBDS3-S8,採用脂質體轉染法,將rbpFBDS3-S8轉染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9細胞包裝病毒,PCR篩選鑒定重組病毒.結果錶明:Sf9昆蟲細胞被侵染72 h後,倒置顯微鏡下觀察到細胞增大,培養液和細胞內齣現顆粒狀物質,部分細胞破裂甚至裂解,說明S3和S8基因已整閤到重組桿狀病毒基因組中,這為開展RGDV主要結構蛋白在昆蟲細胞中的錶達及其功能研究奠定瞭基礎.
위구건휴대수도류왜병독(Rice gall dwarf virus,RGDV)주요내층의각단백S3기인화외층의각단백S8기인적중조간상병독,장목적기인(S3화S8)분별아극륭도간상병독전이재체pFastBacDual다각체계동자(PH)화p10계동자적하유.경매절화학증성서렬측정,장기전화도DH10Bac감수태세포중,획득중조간립rbpFBDS3-S8,채용지질체전염법,장rbpFBDS3-S8전염초지탐야아(Spodoptera frugiperda)Sf9세포포장병독,PCR사선감정중조병독.결과표명:Sf9곤충세포피침염72 h후,도치현미경하관찰도세포증대,배양액화세포내출현과립상물질,부분세포파렬심지렬해,설명S3화S8기인이정합도중조간상병독기인조중,저위개전RGDV주요결구단백재곤충세포중적표체급기공능연구전정료기출.
