中国肿瘤外科杂志
中國腫瘤外科雜誌
중국종류외과잡지
CHINESE MEDICAL DIGEST SURGERY
2012年
4期
209-213
,共5页
恽文%季明华%李文静%李建%钟山亮%唐金海%赵建华
惲文%季明華%李文靜%李建%鐘山亮%唐金海%趙建華
운문%계명화%리문정%리건%종산량%당금해%조건화
荧光定量PCR%miR-122a%乳腺癌%雌激素
熒光定量PCR%miR-122a%乳腺癌%雌激素
형광정량PCR%miR-122a%유선암%자격소
目的 建立一种新的基于连接酶依赖性反应的miR-122a实时定量PCR检测方法 (LDR-qPCR);研究乳腺癌细胞MCF-7中miR-122a的表达以及雌激素水平对其的影响.方法 以乳腺癌细胞MCF-7为样本、成熟的miR-122a为检测对象,将探针的连接反应和实时荧光定量PCR技术相结合,建立LDR-qPCR法,并开展方法 学评价以及不同(有或无激素)培养环境下miR-122a的表达分析.结果 LDR-qPCR法的扩增产物特异,经测序证实为miR-122a;LDR-qPCR法重复性好(cv<10%);检测下限为5 pg/μL总RNA,比茎环RT-qPCR法(50 pg/μL)敏感10倍.miR-122a在激素饥饿的MCF-7细胞中表达上调,约为常规培养细胞的3.65倍;经5 nmol/L雌二醇处理后又出现下调(P=0.040),但未回到常规培养细胞水平.结论 LDR-qPCR法特异、灵敏,检测范围宽;乳腺癌细胞MCF-7可表达miR-122a并受雌激素水平的调节.
目的 建立一種新的基于連接酶依賴性反應的miR-122a實時定量PCR檢測方法 (LDR-qPCR);研究乳腺癌細胞MCF-7中miR-122a的錶達以及雌激素水平對其的影響.方法 以乳腺癌細胞MCF-7為樣本、成熟的miR-122a為檢測對象,將探針的連接反應和實時熒光定量PCR技術相結閤,建立LDR-qPCR法,併開展方法 學評價以及不同(有或無激素)培養環境下miR-122a的錶達分析.結果 LDR-qPCR法的擴增產物特異,經測序證實為miR-122a;LDR-qPCR法重複性好(cv<10%);檢測下限為5 pg/μL總RNA,比莖環RT-qPCR法(50 pg/μL)敏感10倍.miR-122a在激素饑餓的MCF-7細胞中錶達上調,約為常規培養細胞的3.65倍;經5 nmol/L雌二醇處理後又齣現下調(P=0.040),但未迴到常規培養細胞水平.結論 LDR-qPCR法特異、靈敏,檢測範圍寬;乳腺癌細胞MCF-7可錶達miR-122a併受雌激素水平的調節.
목적 건립일충신적기우련접매의뢰성반응적miR-122a실시정량PCR검측방법 (LDR-qPCR);연구유선암세포MCF-7중miR-122a적표체이급자격소수평대기적영향.방법 이유선암세포MCF-7위양본、성숙적miR-122a위검측대상,장탐침적련접반응화실시형광정량PCR기술상결합,건립LDR-qPCR법,병개전방법 학평개이급불동(유혹무격소)배양배경하miR-122a적표체분석.결과 LDR-qPCR법적확증산물특이,경측서증실위miR-122a;LDR-qPCR법중복성호(cv<10%);검측하한위5 pg/μL총RNA,비경배RT-qPCR법(50 pg/μL)민감10배.miR-122a재격소기아적MCF-7세포중표체상조,약위상규배양세포적3.65배;경5 nmol/L자이순처리후우출현하조(P=0.040),단미회도상규배양세포수평.결론 LDR-qPCR법특이、령민,검측범위관;유선암세포MCF-7가표체miR-122a병수자격소수평적조절.
