CAJ | 학술논문

目的构建含HIV-1 B亚型中国株gagV3基因的DNA疫苗及重组腺病毒伴随病毒(rAAV)疫苗,并研究DNA疫苗和rAAV联合免疫的免疫效果.方法将HIV-1 B亚型中国株gagV3基因克隆入真核表达载体pCI-neo上,构建了含HIV-1 gagV3基因的DNA疫苗pCI-gagV3.采用电击法将pCI-gagV3质粒转染p815细胞,用G418压力筛选,得到转入重组质粒的细胞系p815-gagV3,用免疫酶法检测细胞系中HIV-1基因的表达.用该DNA疫苗进行小鼠免疫实验,检测免疫效果;用该DNA疫苗初次免疫,含同样gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒rAAV-gagV3加强免疫,采用免疫酶法检测免疫小鼠血清中HIV-1特异性的抗体水平,用乳酸脱氢酶法检测免疫小鼠的HIV-1特异性CTL水平. 结果 pCI-gagV3可以在p815细胞中表达HIV-1的基因,免疫BALB/c小鼠后可以在小鼠体内诱发HIV-1特异性的细胞和体液免疫反应.HIV-1特异性抗体滴度为1∶20;效靶比为50∶1时,CTL平均杀伤率为41.7%.pCI-gagV3与rAAV-gagV3联合免疫并不能明显提高抗体水平,但可以提高CTL反应,效靶比为50∶1时,CTL平均杀伤率为61.3%,高于单独用DNA疫苗或重组AAV疫苗免疫后产生的CTL活性.结论 DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫可以提高免疫小鼠产生的HIV-1特异性CTL反应.
목적구건함HIV-1 B아형중국주gagV3기인적DNA역묘급중조선병독반수병독(rAAV)역묘,병연구DNA역묘화rAAV연합면역적면역효과.방법장HIV-1 B아형중국주gagV3기인극륭입진핵표체재체pCI-neo상,구건료함HIV-1 gagV3기인적DNA역묘pCI-gagV3.채용전격법장pCI-gagV3질립전염p815세포,용G418압력사선,득도전입중조질립적세포계p815-gagV3,용면역매법검측세포계중HIV-1기인적표체.용해DNA역묘진행소서면역실험,검측면역효과;용해DNA역묘초차면역,함동양gagV3기인적중조선병독반수병독rAAV-gagV3가강면역,채용면역매법검측면역소서혈청중HIV-1특이성적항체수평,용유산탈경매법검측면역소서적HIV-1특이성CTL수평. 결과 pCI-gagV3가이재p815세포중표체HIV-1적기인,면역BALB/c소서후가이재소서체내유발HIV-1특이성적세포화체액면역반응.HIV-1특이성항체적도위1∶20;효파비위50∶1시,CTL평균살상솔위41.7%.pCI-gagV3여rAAV-gagV3연합면역병불능명현제고항체수평,단가이제고CTL반응,효파비위50∶1시,CTL평균살상솔위61.3%,고우단독용DNA역묘혹중조AAV역묘면역후산생적CTL활성.결론 DNA역묘여중조선병독반수병독연합면역가이제고면역소서산생적HIV-1특이성CTL반응.