中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2004年
5期
65-68,72
,共5页
肖顺勇%张鹏飞%熊熙文%王业启%吴厚雄%张健
肖順勇%張鵬飛%熊熙文%王業啟%吳厚雄%張健
초순용%장붕비%웅희문%왕업계%오후웅%장건
AP-2γ基因%GST%表达系统%基因表达%生物活性
AP-2γ基因%GST%錶達繫統%基因錶達%生物活性
AP-2γ기인%GST%표체계통%기인표체%생물활성
AP-2γ基因是AP-2基因家族中非常重要的转录激活因子,它对脊椎动物的胚胎发育起着十分重要的作用,并与细胞的生长及癌变有一定的联系.将人的AP-2γ基因插入表达载体GST系统中的pGEX-4T-2的谷胱苷肽-S-转移酶基因下游,转化E.coli DH5α,鉴定挑选出阳性菌落并扩大培养,提取重组质粒进行DNA测序,确定其阅读框码的正确性.再将正确的重组质粒转化E.coli BL21,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,在Tac启动子作用下,表达出一条81kDa的蛋白质带,所得蛋白质用谷胱苷肽琼脂糖-4B纯化后,得到融合蛋白质,通过凝胶迁移率变动分析和免疫印迹分析实验,测得该蛋白质的部分生物活性,结果表明,它具有很好的生物学活性,为进一步对AP-2γ基因的功能进行研究打下了良好的基础.
AP-2γ基因是AP-2基因傢族中非常重要的轉錄激活因子,它對脊椎動物的胚胎髮育起著十分重要的作用,併與細胞的生長及癌變有一定的聯繫.將人的AP-2γ基因插入錶達載體GST繫統中的pGEX-4T-2的穀胱苷肽-S-轉移酶基因下遊,轉化E.coli DH5α,鑒定挑選齣暘性菌落併擴大培養,提取重組質粒進行DNA測序,確定其閱讀框碼的正確性.再將正確的重組質粒轉化E.coli BL21,用異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導後,在Tac啟動子作用下,錶達齣一條81kDa的蛋白質帶,所得蛋白質用穀胱苷肽瓊脂糖-4B純化後,得到融閤蛋白質,通過凝膠遷移率變動分析和免疫印跡分析實驗,測得該蛋白質的部分生物活性,結果錶明,它具有很好的生物學活性,為進一步對AP-2γ基因的功能進行研究打下瞭良好的基礎.
AP-2γ기인시AP-2기인가족중비상중요적전록격활인자,타대척추동물적배태발육기착십분중요적작용,병여세포적생장급암변유일정적련계.장인적AP-2γ기인삽입표체재체GST계통중적pGEX-4T-2적곡광감태-S-전이매기인하유,전화E.coli DH5α,감정도선출양성균락병확대배양,제취중조질립진행DNA측서,학정기열독광마적정학성.재장정학적중조질립전화E.coli BL21,용이병기류대반유당감(IPTG)유도후,재Tac계동자작용하,표체출일조81kDa적단백질대,소득단백질용곡광감태경지당-4B순화후,득도융합단백질,통과응효천이솔변동분석화면역인적분석실험,측득해단백질적부분생물활성,결과표명,타구유흔호적생물학활성,위진일보대AP-2γ기인적공능진행연구타하료량호적기출.
