CAJ | 학술논문

用2种方法克隆黑龙江鲤(Cyprinus (Cyprinus) carpio haematopterus)的微卫星序列.这2种方法分别是:①经典的小片段DNA克隆库,用末端标记的[γ-32] ATP的CA重复序列为探针筛选;②将酶切获得的小片段DNA用结合有磁珠的并连接有15个CA重复序列的生物素进行富集,获得的含有CA重复的DNA片段并经过两次PCR扩增再克隆的方法获得富集微卫星片段的克隆库.从前一个方法的克隆库中筛选2000个菌落,获得阳性克隆45个,有22个含有微卫星,完美型的占63.6%,非完美型的占22.7%,混合型的占13.7%,重复次数超过10的有9个,占40.9%;从方法②的克隆库中筛选2600个菌落,获得阳性克隆1300个,测序其中的390个克隆,微卫星314个,完美型的占79.0%;非完美型的占14.3%;混合型的占6.7%,重复次数超过10的有293个,占93.3%.结果表明,用生物素结合磁珠富集法克隆微卫星效率高,成本低,所获微卫星质量高,是一种值得推荐的微卫星制备方法.
용2충방법극륭흑룡강리(Cyprinus (Cyprinus) carpio haematopterus)적미위성서렬.저2충방법분별시:①경전적소편단DNA극륭고,용말단표기적[γ-32] ATP적CA중복서렬위탐침사선;②장매절획득적소편단DNA용결합유자주적병련접유15개CA중복서렬적생물소진행부집,획득적함유CA중복적DNA편단병경과량차PCR확증재극륭적방법획득부집미위성편단적극륭고.종전일개방법적극륭고중사선2000개균락,획득양성극륭45개,유22개함유미위성,완미형적점63.6%,비완미형적점22.7%,혼합형적점13.7%,중복차수초과10적유9개,점40.9%;종방법②적극륭고중사선2600개균락,획득양성극륭1300개,측서기중적390개극륭,미위성314개,완미형적점79.0%;비완미형적점14.3%;혼합형적점6.7%,중복차수초과10적유293개,점93.3%.결과표명,용생물소결합자주부집법극륭미위성효솔고,성본저,소획미위성질량고,시일충치득추천적미위성제비방법.