中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2005年
2期
123-125
,共3页
葛永红%严君喜%陈智勇%谢觉林%张雪艳
葛永紅%嚴君喜%陳智勇%謝覺林%張雪豔
갈영홍%엄군희%진지용%사각림%장설염
人促红细胞生成素%密码替换%高密度发酵
人促紅細胞生成素%密碼替換%高密度髮酵
인촉홍세포생성소%밀마체환%고밀도발효
目的研究人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中高效表达及工程菌高密度发酵条件.方法将hEPO基因中大部分大肠杆菌稀有密码子替换成使用频率较高的密码子,人工合成hEPO全基因,然后将其插入表达载体PBV220中,转化大肠杆菌DH5α,挑选构建正确的PBV220-hEPO/DH5α菌落,经升温诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物;观察改变培养基、培养时间、pH及溶氧量等条件对表达产物的影响.结果经酶切分析,DNA测序鉴定,人工合成的hEPO基因已正确构建到表达载体中.通过高密度发酵培养,最终菌体密度达A500=30(相当于菌体35g/L),hEPO表达量达30%左右.结论人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中得到高效表达,并确定了该工程菌高密度发酵的适宜条件.
目的研究人工閤成的hEPO基因在大腸桿菌中高效錶達及工程菌高密度髮酵條件.方法將hEPO基因中大部分大腸桿菌稀有密碼子替換成使用頻率較高的密碼子,人工閤成hEPO全基因,然後將其插入錶達載體PBV220中,轉化大腸桿菌DH5α,挑選構建正確的PBV220-hEPO/DH5α菌落,經升溫誘導,SDS-PAGE和Western blot鑒定錶達產物;觀察改變培養基、培養時間、pH及溶氧量等條件對錶達產物的影響.結果經酶切分析,DNA測序鑒定,人工閤成的hEPO基因已正確構建到錶達載體中.通過高密度髮酵培養,最終菌體密度達A500=30(相噹于菌體35g/L),hEPO錶達量達30%左右.結論人工閤成的hEPO基因在大腸桿菌中得到高效錶達,併確定瞭該工程菌高密度髮酵的適宜條件.
목적연구인공합성적hEPO기인재대장간균중고효표체급공정균고밀도발효조건.방법장hEPO기인중대부분대장간균희유밀마자체환성사용빈솔교고적밀마자,인공합성hEPO전기인,연후장기삽입표체재체PBV220중,전화대장간균DH5α,도선구건정학적PBV220-hEPO/DH5α균락,경승온유도,SDS-PAGE화Western blot감정표체산물;관찰개변배양기、배양시간、pH급용양량등조건대표체산물적영향.결과경매절분석,DNA측서감정,인공합성적hEPO기인이정학구건도표체재체중.통과고밀도발효배양,최종균체밀도체A500=30(상당우균체35g/L),hEPO표체량체30%좌우.결론인공합성적hEPO기인재대장간균중득도고효표체,병학정료해공정균고밀도발효적괄의조건.
