CAJ | 학술논문

[目的]克隆、分析和原核表达编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的cDNA.[方法]以13个不同日龄中华蜜蜂工蜂触角为材料,通过RT-PCR技术以获得编码中华蜜蜂Apis cerana cerana气味结合蛋白ASP2基因成熟蛋白开放阅读框序列,并在pET-30a(+)/BL21(DE3)系统中进行原核表达.[结果]克隆了命名为Acer-ASP2(GenBank登录号:DQ449667)的中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2基因,该序列全长429 bp,编码142个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为15.7 kD和4.36.预测蛋白具有昆虫气味结合蛋白典型的6个保守的半胱氨酸残基的特征,进一步分析表明Acer-ASP2极有可能属于GOBP家族.构建的原核表达载体pET/Acer-ASP2,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出一个分子量约为21kD的融合蛋白,融合蛋白大部分以包涵体的形式存在于菌体沉淀中(约59.7%),经洗涤和尿素梯度溶解对包涵体进行了纯化,经凝胶光密度扫描分析,约占最终产物的81.2%左右.[结论]克隆、分析和表达了一个新的编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA序列,为进一步研究其分子结构和功能奠定了基础.
[목적]극륭、분석화원핵표체편마중화밀봉기미결합단백ASP2적cDNA.[방법]이13개불동일령중화밀봉공봉촉각위재료,통과RT-PCR기술이획득편마중화밀봉Apis cerana cerana기미결합단백ASP2기인성숙단백개방열독광서렬,병재pET-30a(+)/BL21(DE3)계통중진행원핵표체.[결과]극륭료명명위Acer-ASP2(GenBank등록호:DQ449667)적중화밀봉기미결합단백ASP2기인,해서렬전장429 bp,편마142개안기산잔기,예측분자량화등전점분별위15.7 kD화4.36.예측단백구유곤충기미결합단백전형적6개보수적반광안산잔기적특정,진일보분석표명Acer-ASP2겁유가능속우GOBP가족.구건적원핵표체재체pET/Acer-ASP2,재대장간균BL21(DE3)중성공지표체출일개분자량약위21kD적융합단백,융합단백대부분이포함체적형식존재우균체침정중(약59.7%),경세조화뇨소제도용해대포함체진행료순화,경응효광밀도소묘분석,약점최종산물적81.2%좌우.[결론]극륭、분석화표체료일개신적편마중화밀봉기미결합단백ASP2 cDNA서렬,위진일보연구기분자결구화공능전정료기출.