中国卫生检验杂志
中國衛生檢驗雜誌
중국위생검험잡지
CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY
2008年
10期
1974-1976
,共3页
张蕾%张海婧%段素素%赵艳%车昌燕%张云%王树蕙%刘力
張蕾%張海婧%段素素%趙豔%車昌燕%張雲%王樹蕙%劉力
장뢰%장해청%단소소%조염%차창연%장운%왕수혜%류력
RNA依赖的RNA聚合酶%原核表达%真核表达%蛋白纯化
RNA依賴的RNA聚閤酶%原覈錶達%真覈錶達%蛋白純化
RNA의뢰적RNA취합매%원핵표체%진핵표체%단백순화
目的:在大肠杆菌中表达和纯化重组RDRP蛋白,观察RDRP蛋白在293细胞中的表达及亚细胞定位.方法:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-RDRP,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白.构建真核表达载体pCMV-myc-RDRP瞬时转染293细胞,转染48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位以及Western Blotting检测.结果:成功构建了表达RDRP融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到分子量约为121 kDa的融合蛋白.RDRP蛋白在293细胞中高效表达,主要分布在细胞质.结论:获得了重组GST-RDRP融合蛋白,为进一步探讨RDRP的功能奠定基础,在真核细胞中过表达的RDRP蛋白主要定位在细胞质.
目的:在大腸桿菌中錶達和純化重組RDRP蛋白,觀察RDRP蛋白在293細胞中的錶達及亞細胞定位.方法:構建原覈錶達質粒pGEX-4T-1-RDRP,實現插入基因的融閤錶達,經GST親閤層析純化蛋白.構建真覈錶達載體pCMV-myc-RDRP瞬時轉染293細胞,轉染48 h後免疫熒光染色,共聚焦顯微鏡觀察蛋白錶達及定位以及Western Blotting檢測.結果:成功構建瞭錶達RDRP融閤蛋白的原覈錶達載體,併在大腸桿菌內高效錶達,純化後得到分子量約為121 kDa的融閤蛋白.RDRP蛋白在293細胞中高效錶達,主要分佈在細胞質.結論:穫得瞭重組GST-RDRP融閤蛋白,為進一步探討RDRP的功能奠定基礎,在真覈細胞中過錶達的RDRP蛋白主要定位在細胞質.
목적:재대장간균중표체화순화중조RDRP단백,관찰RDRP단백재293세포중적표체급아세포정위.방법:구건원핵표체질립pGEX-4T-1-RDRP,실현삽입기인적융합표체,경GST친합층석순화단백.구건진핵표체재체pCMV-myc-RDRP순시전염293세포,전염48 h후면역형광염색,공취초현미경관찰단백표체급정위이급Western Blotting검측.결과:성공구건료표체RDRP융합단백적원핵표체재체,병재대장간균내고효표체,순화후득도분자량약위121 kDa적융합단백.RDRP단백재293세포중고효표체,주요분포재세포질.결론:획득료중조GST-RDRP융합단백,위진일보탐토RDRP적공능전정기출,재진핵세포중과표체적RDRP단백주요정위재세포질.
