CAJ | 학술논문

背景:在前期DNA重组技术构建端粒酶反转录酶基因真核表达的质粒、端粒酶反转录酶基因基因转染大鼠胰岛素分泌细胞的基础上,得到永生化的胰岛素分泌细胞系,建立了稳定一致的细胞模型.目的:端粒酶转染健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,建立均一稳定的胰岛素分泌细胞系,为临床胰岛素分泌细胞移植治疗糖尿病奠定实验基础.设计、时间及单位:动物实验观察,2007-02/05在辽宁医学院人类学研究所完成.材料:健康成年SD大鼠20只,取其胰岛细胞的分离、纯化、培养及鉴定.方法:原代培养健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,采用V型胶原酶消化和Ficoll 400纯化液纯化.经双硫腙染色和高效液相包谱分离及质谱分析的方法对分离得到的胰岛素分泌细胞进行检测.采用含有端粒酶反转录酶基因的载体转染大鼠胰岛素分泌细胞,经G418筛选后得到阳性细胞克隆,并在体外进行连续的传代培养.应用RT-PCR方法检测hTERT基因在细胞中的整合和表达情况,同时用高效液相色谱分离法对转染后的细胞分泌胰岛素的功能进行检测.主要观察指标:①胰岛细胞在经过端粒酶反转录酶基因转染前后的细胞生长情况.②转染后的细胞在体外的传代培养情况.③细胞的胰岛素分泌情况.结果:端粒酶反转录酶基因转染后细胞与未转染的细胞对比活力良好并且仍有分泌胰岛素的功能,可在体外连续的进行传代培养(目前已传至第15代,仍在进一步传代培养中),同时外源性的hTERT基因在转染后的胰岛素分泌细胞中有稳定的整合并表达.结论:转染后的细胞具有分泌胰岛素的功能并可以在体外连续传代培养,端粒酶反转录酶基因在胰岛素分泌细胞中稳定的整合并表达,胰岛素分泌细胞的永生化细胞系基本建立.
배경:재전기DNA중조기술구건단립매반전록매기인진핵표체적질립、단립매반전록매기인기인전염대서이도소분비세포적기출상,득도영생화적이도소분비세포계,건립료은정일치적세포모형.목적:단립매전염건강성년SD대서적이도소분비세포,건립균일은정적이도소분비세포계,위림상이도소분비세포이식치료당뇨병전정실험기출.설계、시간급단위:동물실험관찰,2007-02/05재료녕의학원인류학연구소완성.재료:건강성년SD대서20지,취기이도세포적분리、순화、배양급감정.방법:원대배양건강성년SD대서적이도소분비세포,채용V형효원매소화화Ficoll 400순화액순화.경쌍류종염색화고효액상포보분리급질보분석적방법대분리득도적이도소분비세포진행검측.채용함유단립매반전록매기인적재체전염대서이도소분비세포,경G418사선후득도양성세포극륭,병재체외진행련속적전대배양.응용RT-PCR방법검측hTERT기인재세포중적정합화표체정황,동시용고효액상색보분리법대전염후적세포분비이도소적공능진행검측.주요관찰지표:①이도세포재경과단립매반전록매기인전염전후적세포생장정황.②전염후적세포재체외적전대배양정황.③세포적이도소분비정황.결과:단립매반전록매기인전염후세포여미전염적세포대비활력량호병차잉유분비이도소적공능,가재체외련속적진행전대배양(목전이전지제15대,잉재진일보전대배양중),동시외원성적hTERT기인재전염후적이도소분비세포중유은정적정합병표체.결론:전염후적세포구유분비이도소적공능병가이재체외련속전대배양,단립매반전록매기인재이도소분비세포중은정적정합병표체,이도소분비세포적영생화세포계기본건립.