中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2005年
22期
52-55
,共4页
目的:观察在体外培养条件下,具有强大的增殖和分化为肝细胞能力的骨髓间质干细胞输注治疗肝纤维化模型大鼠对其肝纤维化形成的影响及肝功能和生存分析,并对治疗组、空白对照组和病理对照组7周内的相关情况予以对照比较.方法:实验于2003-08/2004-10在中山大学基础医学院病理学于病理生理实验室完成.①动物分组:选用雄性6周龄Wistar大鼠5只为供体,供分离骨髓间质干细胞;雌性6周龄Wistar大鼠60只,其中50只被造成肝纤维化模型,在首次用二甲基亚硝胺处理后的第10天,将造模大鼠随机分为2组:骨髓间质干细胞治疗组10只(为受体),于治疗39 d后结束实验,取材分析病理对照组40只.另10只作为空白对照组(仅静脉注射生理盐水).②肝纤维化模型制作:在实验的当天,给予10g/L二甲基亚硝胺溶液(生理盐水配置)1 mL/kg,腹腔注射,每周连续3次,共6周.③骨髓间质干细胞治疗组:每只大鼠输注3×106个骨髓间质干细胞;病理对照组:使用等体积生理盐水代替骨髓间质干细胞.④动物的一般生活状态:每天观察饮食、活动、二便、体质量、皮毛、呼吸情况等.⑤肝脏的组织细胞形态结构:将肝组织以苏木精-伊红染色后观察.⑥肝星形细胞及其活化程度检测:前者检测肝脏α-平滑肌肌动蛋白含量,用免疫组织化学染色法,后者以德国IBAS2.5图像分析软件半定量分析.⑦肝脏胶原分布的相对含量检测:采用Masson三色染色法,从而反映肝纤维化程度.⑧肝脏羟脯氨酸含量测定:采用氯胺T法.⑨血清总胆红素和谷丙转氨酶水平检测:采用全自动生化分析仪.⑩血清层粘蛋白和透明质酸水平测定:采用放射免疫法.11雄性大鼠骨髓间质干细胞在雌性大鼠肝内的Y染色体性别决定区基因的表达检测:采用聚合酶链式反应.12统计学分析:两组样本均数比较采用t检验;多组样本均数比较采用方差分析,两两比较采用q检验;生存分析采用K,plan-Meier法.结果:雌性大鼠60只进入结果分析.①实验动物生存状况:造模6周后,骨髓间质干细胞治疗组生存率为80%,而病理对照组生存率为10%,空白对照组生存率为100%,说明骨髓间质干细胞治疗可能通过阻止肝纤维化发展,从改而善大鼠的生存率.②肝脏组织学显示,骨髓间质干细胞治疗组的肝脏结构明显改善,炎症减轻、假小叶结构减少或消散.相反,病理对照组出现广泛的肝脏结构重塑,包括增厚的纤维间隔形成和明显的桥接坏死.半定量分析胶原染色,骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(8.12±1.98,15.71±2.13,t=6.11,P＜0.05).③肝脏星状细胞活化的标志α-平滑肌激动蛋白的阳性表达:空白对照组仅见血管壁有少量α-平滑肌激动蛋白的阳性表达,而病理对照组和骨髓间质干细胞治疗组可见在纤维间隔、肝窦和汇管区内明显表达.半定量分析α-平滑肌激动蛋白的阳性染色,骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(11.06±2.03,18.50±3.87,t=4.47,P＜0.05).④Y染色体性别决定区基因的表达:经雄性Wistar大鼠(供体)骨髓间质干细胞治疗39 d的雌性大鼠,肝脏DNA经聚合酶链式反应检测结果显示,Y染色体性别决定区基因的表达阳性,而空白对照组和病理对照组则无此阳性信号.说明骨髓间质干细胞移植后,能够在受体肝内存活5周以上.⑤反映肝脏纤维化程度的肝脏羟脯氨酸含量及血清层黏蛋白和透明质酸水平:骨髓间质干细胞治疗组明显高于空白对照组(P＜0 05)但明显低于病理对照组(P＜0.05),说明骨髓间质干细胞治疗后能够减少肝脏胶原蛋白的含量,从而减少肝纤维化的形成,使肝纤维化得到控制.⑥反映肝功能的血清总胆红素、谷丙转氨酶水平:骨髓间质干细胞治疗组明显低于病理对照组(P＜0.05),接近空白对照组.说明了骨髓间质干细胞治疗有助于改善肝功能状态.结论:①二甲基亚硝胺能成功诱导大鼠肝纤维化模型的建立.②骨髓间质干细胞可改善肝纤维化大鼠的生存状况和肝功能.③骨髓间质干细胞能够减少肝脏胶原蛋白的产生,抑制肝纤维化形成.④肝纤维化发生发展过程中活化态的肝星状细胞数量减少可能是骨髓间质干细胞抑制肝纤维化形成的原因之一.⑤雌性大鼠肝脏内存在雄性供体Y染色体性别决定区基因的信号说明骨髓间质干细胞能够在受体肝内存活5周以上.
目的:觀察在體外培養條件下,具有彊大的增殖和分化為肝細胞能力的骨髓間質榦細胞輸註治療肝纖維化模型大鼠對其肝纖維化形成的影響及肝功能和生存分析,併對治療組、空白對照組和病理對照組7週內的相關情況予以對照比較.方法:實驗于2003-08/2004-10在中山大學基礎醫學院病理學于病理生理實驗室完成.①動物分組:選用雄性6週齡Wistar大鼠5隻為供體,供分離骨髓間質榦細胞;雌性6週齡Wistar大鼠60隻,其中50隻被造成肝纖維化模型,在首次用二甲基亞硝胺處理後的第10天,將造模大鼠隨機分為2組:骨髓間質榦細胞治療組10隻(為受體),于治療39 d後結束實驗,取材分析病理對照組40隻.另10隻作為空白對照組(僅靜脈註射生理鹽水).②肝纖維化模型製作:在實驗的噹天,給予10g/L二甲基亞硝胺溶液(生理鹽水配置)1 mL/kg,腹腔註射,每週連續3次,共6週.③骨髓間質榦細胞治療組:每隻大鼠輸註3×106箇骨髓間質榦細胞;病理對照組:使用等體積生理鹽水代替骨髓間質榦細胞.④動物的一般生活狀態:每天觀察飲食、活動、二便、體質量、皮毛、呼吸情況等.⑤肝髒的組織細胞形態結構:將肝組織以囌木精-伊紅染色後觀察.⑥肝星形細胞及其活化程度檢測:前者檢測肝髒α-平滑肌肌動蛋白含量,用免疫組織化學染色法,後者以德國IBAS2.5圖像分析軟件半定量分析.⑦肝髒膠原分佈的相對含量檢測:採用Masson三色染色法,從而反映肝纖維化程度.⑧肝髒羥脯氨痠含量測定:採用氯胺T法.⑨血清總膽紅素和穀丙轉氨酶水平檢測:採用全自動生化分析儀.⑩血清層粘蛋白和透明質痠水平測定:採用放射免疫法.11雄性大鼠骨髓間質榦細胞在雌性大鼠肝內的Y染色體性彆決定區基因的錶達檢測:採用聚閤酶鏈式反應.12統計學分析:兩組樣本均數比較採用t檢驗;多組樣本均數比較採用方差分析,兩兩比較採用q檢驗;生存分析採用K,plan-Meier法.結果:雌性大鼠60隻進入結果分析.①實驗動物生存狀況:造模6週後,骨髓間質榦細胞治療組生存率為80%,而病理對照組生存率為10%,空白對照組生存率為100%,說明骨髓間質榦細胞治療可能通過阻止肝纖維化髮展,從改而善大鼠的生存率.②肝髒組織學顯示,骨髓間質榦細胞治療組的肝髒結構明顯改善,炎癥減輕、假小葉結構減少或消散.相反,病理對照組齣現廣汎的肝髒結構重塑,包括增厚的纖維間隔形成和明顯的橋接壞死.半定量分析膠原染色,骨髓間質榦細胞治療組較病理對照組顯著減低(8.12±1.98,15.71±2.13,t=6.11,P＜0.05).③肝髒星狀細胞活化的標誌α-平滑肌激動蛋白的暘性錶達:空白對照組僅見血管壁有少量α-平滑肌激動蛋白的暘性錶達,而病理對照組和骨髓間質榦細胞治療組可見在纖維間隔、肝竇和彙管區內明顯錶達.半定量分析α-平滑肌激動蛋白的暘性染色,骨髓間質榦細胞治療組較病理對照組顯著減低(11.06±2.03,18.50±3.87,t=4.47,P＜0.05).④Y染色體性彆決定區基因的錶達:經雄性Wistar大鼠(供體)骨髓間質榦細胞治療39 d的雌性大鼠,肝髒DNA經聚閤酶鏈式反應檢測結果顯示,Y染色體性彆決定區基因的錶達暘性,而空白對照組和病理對照組則無此暘性信號.說明骨髓間質榦細胞移植後,能夠在受體肝內存活5週以上.⑤反映肝髒纖維化程度的肝髒羥脯氨痠含量及血清層黏蛋白和透明質痠水平:骨髓間質榦細胞治療組明顯高于空白對照組(P＜0 05)但明顯低于病理對照組(P＜0.05),說明骨髓間質榦細胞治療後能夠減少肝髒膠原蛋白的含量,從而減少肝纖維化的形成,使肝纖維化得到控製.⑥反映肝功能的血清總膽紅素、穀丙轉氨酶水平:骨髓間質榦細胞治療組明顯低于病理對照組(P＜0.05),接近空白對照組.說明瞭骨髓間質榦細胞治療有助于改善肝功能狀態.結論:①二甲基亞硝胺能成功誘導大鼠肝纖維化模型的建立.②骨髓間質榦細胞可改善肝纖維化大鼠的生存狀況和肝功能.③骨髓間質榦細胞能夠減少肝髒膠原蛋白的產生,抑製肝纖維化形成.④肝纖維化髮生髮展過程中活化態的肝星狀細胞數量減少可能是骨髓間質榦細胞抑製肝纖維化形成的原因之一.⑤雌性大鼠肝髒內存在雄性供體Y染色體性彆決定區基因的信號說明骨髓間質榦細胞能夠在受體肝內存活5週以上.
목적:관찰재체외배양조건하,구유강대적증식화분화위간세포능력적골수간질간세포수주치료간섬유화모형대서대기간섬유화형성적영향급간공능화생존분석,병대치료조、공백대조조화병리대조조7주내적상관정황여이대조비교.방법:실험우2003-08/2004-10재중산대학기출의학원병이학우병리생리실험실완성.①동물분조:선용웅성6주령Wistar대서5지위공체,공분리골수간질간세포;자성6주령Wistar대서60지,기중50지피조성간섬유화모형,재수차용이갑기아초알처리후적제10천,장조모대서수궤분위2조:골수간질간세포치료조10지(위수체),우치료39 d후결속실험,취재분석병리대조조40지.령10지작위공백대조조(부정맥주사생리염수).②간섬유화모형제작:재실험적당천,급여10g/L이갑기아초알용액(생리염수배치)1 mL/kg,복강주사,매주련속3차,공6주.③골수간질간세포치료조:매지대서수주3×106개골수간질간세포;병리대조조:사용등체적생리염수대체골수간질간세포.④동물적일반생활상태:매천관찰음식、활동、이편、체질량、피모、호흡정황등.⑤간장적조직세포형태결구:장간조직이소목정-이홍염색후관찰.⑥간성형세포급기활화정도검측:전자검측간장α-평활기기동단백함량,용면역조직화학염색법,후자이덕국IBAS2.5도상분석연건반정량분석.⑦간장효원분포적상대함량검측:채용Masson삼색염색법,종이반영간섬유화정도.⑧간장간포안산함량측정:채용록알T법.⑨혈청총담홍소화곡병전안매수평검측:채용전자동생화분석의.⑩혈청층점단백화투명질산수평측정:채용방사면역법.11웅성대서골수간질간세포재자성대서간내적Y염색체성별결정구기인적표체검측:채용취합매련식반응.12통계학분석:량조양본균수비교채용t검험;다조양본균수비교채용방차분석,량량비교채용q검험;생존분석채용K,plan-Meier법.결과:자성대서60지진입결과분석.①실험동물생존상황:조모6주후,골수간질간세포치료조생존솔위80%,이병리대조조생존솔위10%,공백대조조생존솔위100%,설명골수간질간세포치료가능통과조지간섬유화발전,종개이선대서적생존솔.②간장조직학현시,골수간질간세포치료조적간장결구명현개선,염증감경、가소협결구감소혹소산.상반,병리대조조출현엄범적간장결구중소,포괄증후적섬유간격형성화명현적교접배사.반정량분석효원염색,골수간질간세포치료조교병리대조조현저감저(8.12±1.98,15.71±2.13,t=6.11,P＜0.05).③간장성상세포활화적표지α-평활기격동단백적양성표체:공백대조조부견혈관벽유소량α-평활기격동단백적양성표체,이병리대조조화골수간질간세포치료조가견재섬유간격、간두화회관구내명현표체.반정량분석α-평활기격동단백적양성염색,골수간질간세포치료조교병리대조조현저감저(11.06±2.03,18.50±3.87,t=4.47,P＜0.05).④Y염색체성별결정구기인적표체:경웅성Wistar대서(공체)골수간질간세포치료39 d적자성대서,간장DNA경취합매련식반응검측결과현시,Y염색체성별결정구기인적표체양성,이공백대조조화병리대조조칙무차양성신호.설명골수간질간세포이식후,능구재수체간내존활5주이상.⑤반영간장섬유화정도적간장간포안산함량급혈청층점단백화투명질산수평:골수간질간세포치료조명현고우공백대조조(P＜0 05)단명현저우병리대조조(P＜0.05),설명골수간질간세포치료후능구감소간장효원단백적함량,종이감소간섬유화적형성,사간섬유화득도공제.⑥반영간공능적혈청총담홍소、곡병전안매수평:골수간질간세포치료조명현저우병리대조조(P＜0.05),접근공백대조조.설명료골수간질간세포치료유조우개선간공능상태.결론:①이갑기아초알능성공유도대서간섬유화모형적건립.②골수간질간세포가개선간섬유화대서적생존상황화간공능.③골수간질간세포능구감소간장효원단백적산생,억제간섬유화형성.④간섬유화발생발전과정중활화태적간성상세포수량감소가능시골수간질간세포억제간섬유화형성적원인지일.⑤자성대서간장내존재웅성공체Y염색체성별결정구기인적신호설명골수간질간세포능구재수체간내존활5주이상.
