临床肝胆病杂志
臨床肝膽病雜誌
림상간담병잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2006年
2期
127-130
,共4页
周鸿科%杨冬华%汤绍辉%黄卫
週鴻科%楊鼕華%湯紹輝%黃衛
주홍과%양동화%탕소휘%황위
胸苷激酶%增强型绿色荧光蛋白%穿梭质粒%癌,肝细胞
胸苷激酶%增彊型綠色熒光蛋白%穿梭質粒%癌,肝細胞
흉감격매%증강형록색형광단백%천사질립%암,간세포
构建携带胸苷激酶(tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因穿梭质粒,并观察其在肝癌细胞系HepG2细胞中的表达.应用基因重组技术,构建EGFP与tk的融合表达穿梭质粒载体,经限制酶切鉴定和测序分析,脂质体转染将其导入HepG2中,48h后用荧光显微镜观察荧光的表达,RT-PCR法检测融合蛋白tk和EGFP的mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测转染融合蛋白载体后不同浓度的更昔洛韦(GCV)对HepG2细胞的细胞毒作用.酶切鉴定和测序分析证实重组质粒中插入融合目的基因片断及载体DNA大小、方向和插入位点正确,在转染此穿梭质粒的HepG2细胞中检测到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR检测到融合蛋白tk和EGFP的mRNA表达;GCV对转染了携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体有明显的细胞毒作用.成功构建携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体,转染人肝癌细胞株HepG2中tk和EGFP的独立表达没有受到影响,该载体可利用绿色荧光蛋白作为报告基因监测tk的表达并可用于肝癌的自杀基因治疗.
構建攜帶胸苷激酶(tk)與增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)融閤基因穿梭質粒,併觀察其在肝癌細胞繫HepG2細胞中的錶達.應用基因重組技術,構建EGFP與tk的融閤錶達穿梭質粒載體,經限製酶切鑒定和測序分析,脂質體轉染將其導入HepG2中,48h後用熒光顯微鏡觀察熒光的錶達,RT-PCR法檢測融閤蛋白tk和EGFP的mRNA錶達,四甲基偶氮唑藍(MTT)實驗檢測轉染融閤蛋白載體後不同濃度的更昔洛韋(GCV)對HepG2細胞的細胞毒作用.酶切鑒定和測序分析證實重組質粒中插入融閤目的基因片斷及載體DNA大小、方嚮和插入位點正確,在轉染此穿梭質粒的HepG2細胞中檢測到綠色熒光蛋白的錶達,RT-PCR檢測到融閤蛋白tk和EGFP的mRNA錶達;GCV對轉染瞭攜帶tk與EGFP融閤基因穿梭質粒載體有明顯的細胞毒作用.成功構建攜帶tk與EGFP融閤基因穿梭質粒載體,轉染人肝癌細胞株HepG2中tk和EGFP的獨立錶達沒有受到影響,該載體可利用綠色熒光蛋白作為報告基因鑑測tk的錶達併可用于肝癌的自殺基因治療.
구건휴대흉감격매(tk)여증강형록색형광단백(EGFP)융합기인천사질립,병관찰기재간암세포계HepG2세포중적표체.응용기인중조기술,구건EGFP여tk적융합표체천사질립재체,경한제매절감정화측서분석,지질체전염장기도입HepG2중,48h후용형광현미경관찰형광적표체,RT-PCR법검측융합단백tk화EGFP적mRNA표체,사갑기우담서람(MTT)실험검측전염융합단백재체후불동농도적경석락위(GCV)대HepG2세포적세포독작용.매절감정화측서분석증실중조질립중삽입융합목적기인편단급재체DNA대소、방향화삽입위점정학,재전염차천사질립적HepG2세포중검측도록색형광단백적표체,RT-PCR검측도융합단백tk화EGFP적mRNA표체;GCV대전염료휴대tk여EGFP융합기인천사질립재체유명현적세포독작용.성공구건휴대tk여EGFP융합기인천사질립재체,전염인간암세포주HepG2중tk화EGFP적독립표체몰유수도영향,해재체가이용록색형광단백작위보고기인감측tk적표체병가용우간암적자살기인치료.
