南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
6期
730-733
,共4页
安政雯%刘宏伟%贾志敏%李照峰%Staffan Str(o)mblad%张宏权
安政雯%劉宏偉%賈誌敏%李照峰%Staffan Str(o)mblad%張宏權
안정문%류굉위%가지민%리조봉%Staffan Str(o)mblad%장굉권
PAK5%基因克隆%蛋白表达%多克隆抗体%牙胚细胞
PAK5%基因剋隆%蛋白錶達%多剋隆抗體%牙胚細胞
PAK5%기인극륭%단백표체%다극륭항체%아배세포
目的克隆PAK5-N端基因并诱导其表达,进行多克隆抗体制备,为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础.方法根据人全长PAK5 cDNA序列,设计引物;利用PCR技术,以PAK5全长cDNA为模板扩增PAK5-N端基因,将扩增产物克隆至pGEX-4T-1载体中,经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后进行重组质粒鉴定,DNA测序.以硫代半乳糖苷诱导其在大肠杆菌BL21中表达.利用GST融合蛋白纯化系统进行蛋白纯化,通过免疫家兔制备多克隆抗体,并在牙胚细胞中进行了初步研究.结果和结论成功克隆了PAK5-N端基因,在E.coli中表达了PAK5-NT,并纯化了GST融合蛋白,制备了PAK5特异性抗体.Westernblotting表明PAK5在牙胚细胞中过度表达,为其在口腔细胞中的生物学功能研究提供了依据.
目的剋隆PAK5-N耑基因併誘導其錶達,進行多剋隆抗體製備,為研究其在牙胚細胞中的生物學功能奠定基礎.方法根據人全長PAK5 cDNA序列,設計引物;利用PCR技術,以PAK5全長cDNA為模闆擴增PAK5-N耑基因,將擴增產物剋隆至pGEX-4T-1載體中,經EcoRⅠ/XhoⅠ雙酶切後進行重組質粒鑒定,DNA測序.以硫代半乳糖苷誘導其在大腸桿菌BL21中錶達.利用GST融閤蛋白純化繫統進行蛋白純化,通過免疫傢兔製備多剋隆抗體,併在牙胚細胞中進行瞭初步研究.結果和結論成功剋隆瞭PAK5-N耑基因,在E.coli中錶達瞭PAK5-NT,併純化瞭GST融閤蛋白,製備瞭PAK5特異性抗體.Westernblotting錶明PAK5在牙胚細胞中過度錶達,為其在口腔細胞中的生物學功能研究提供瞭依據.
목적극륭PAK5-N단기인병유도기표체,진행다극륭항체제비,위연구기재아배세포중적생물학공능전정기출.방법근거인전장PAK5 cDNA서렬,설계인물;이용PCR기술,이PAK5전장cDNA위모판확증PAK5-N단기인,장확증산물극륭지pGEX-4T-1재체중,경EcoRⅠ/XhoⅠ쌍매절후진행중조질립감정,DNA측서.이류대반유당감유도기재대장간균BL21중표체.이용GST융합단백순화계통진행단백순화,통과면역가토제비다극륭항체,병재아배세포중진행료초보연구.결과화결론성공극륭료PAK5-N단기인,재E.coli중표체료PAK5-NT,병순화료GST융합단백,제비료PAK5특이성항체.Westernblotting표명PAK5재아배세포중과도표체,위기재구강세포중적생물학공능연구제공료의거.
