生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2007年
3期
275-282
,共8页
大鼠%胚胎神经干细胞%L-型钙通道%增殖%分化
大鼠%胚胎神經榦細胞%L-型鈣通道%增殖%分化
대서%배태신경간세포%L-형개통도%증식%분화
为鉴定大鼠胚胎海马神经干细胞(NSCs)是否表达功能性的L-型钙通道,L-型钙通道是否参与了对大鼠胚胎NSCs增殖和分化调控.分离孕15天Wistar大鼠胚胎海马组织,制成单细胞悬液,利用无血清培养技术,在添加bFGF、EGF、N-2和B27 supplement的DMEM/F12培养液中进行培养.采用细胞免疫荧光法对原代至第5代细胞进行鉴定,均有巢蛋白(nestin)的表达,第3代nestin阳性细胞比例达97%.把培养的细胞诱导分化5天后,这些细胞表现为神经元和星形胶质细胞的形态,且分别呈Ⅲ型β-微管蛋白(Tuj1)阳性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性;细胞免疫印迹结果显示,NSCs表达L-型钙通道的Cav1.2α1C亚单位,而无Cav1.3α1D亚单位的表达;利用全细胞膜片钳技术在NSCs上记录到了L-型钙电流,证明了NSCs所表达的L-型钙通道具有功能.进一步对细胞进行药理学干预,发现L-型钙通道的激活不仅可以促进胚胎NSCs的增殖,而且使增殖的NSCs向神经元分化的比例显著增加.以上结果表明,Wistar大鼠胚胎海马NSCs表达功能性的L-型钙通道;L-型钙通道参与了胚胎NSCs增殖和分化的调控.
為鑒定大鼠胚胎海馬神經榦細胞(NSCs)是否錶達功能性的L-型鈣通道,L-型鈣通道是否參與瞭對大鼠胚胎NSCs增殖和分化調控.分離孕15天Wistar大鼠胚胎海馬組織,製成單細胞懸液,利用無血清培養技術,在添加bFGF、EGF、N-2和B27 supplement的DMEM/F12培養液中進行培養.採用細胞免疫熒光法對原代至第5代細胞進行鑒定,均有巢蛋白(nestin)的錶達,第3代nestin暘性細胞比例達97%.把培養的細胞誘導分化5天後,這些細胞錶現為神經元和星形膠質細胞的形態,且分彆呈Ⅲ型β-微管蛋白(Tuj1)暘性和膠質纖維痠性蛋白(GFAP)暘性;細胞免疫印跡結果顯示,NSCs錶達L-型鈣通道的Cav1.2α1C亞單位,而無Cav1.3α1D亞單位的錶達;利用全細胞膜片鉗技術在NSCs上記錄到瞭L-型鈣電流,證明瞭NSCs所錶達的L-型鈣通道具有功能.進一步對細胞進行藥理學榦預,髮現L-型鈣通道的激活不僅可以促進胚胎NSCs的增殖,而且使增殖的NSCs嚮神經元分化的比例顯著增加.以上結果錶明,Wistar大鼠胚胎海馬NSCs錶達功能性的L-型鈣通道;L-型鈣通道參與瞭胚胎NSCs增殖和分化的調控.
위감정대서배태해마신경간세포(NSCs)시부표체공능성적L-형개통도,L-형개통도시부삼여료대대서배태NSCs증식화분화조공.분리잉15천Wistar대서배태해마조직,제성단세포현액,이용무혈청배양기술,재첨가bFGF、EGF、N-2화B27 supplement적DMEM/F12배양액중진행배양.채용세포면역형광법대원대지제5대세포진행감정,균유소단백(nestin)적표체,제3대nestin양성세포비례체97%.파배양적세포유도분화5천후,저사세포표현위신경원화성형효질세포적형태,차분별정Ⅲ형β-미관단백(Tuj1)양성화효질섬유산성단백(GFAP)양성;세포면역인적결과현시,NSCs표체L-형개통도적Cav1.2α1C아단위,이무Cav1.3α1D아단위적표체;이용전세포막편겸기술재NSCs상기록도료L-형개전류,증명료NSCs소표체적L-형개통도구유공능.진일보대세포진행약이학간예,발현L-형개통도적격활불부가이촉진배태NSCs적증식,이차사증식적NSCs향신경원분화적비례현저증가.이상결과표명,Wistar대서배태해마NSCs표체공능성적L-형개통도;L-형개통도삼여료배태NSCs증식화분화적조공.
