人ERβ AF1融合蛋白的表达及其多克隆抗体制备
인ERβ AF1융합단백적표체급기다극륭항체제비
  • 万方数据
    细胞与分子免疫学杂志 세포여분자면역학잡지

    2008年 3期 247-249 ,共3页

    袁斌%仇玮祎%李杰之%丁丽华%韩聚强%熊志红%杨智洪%叶棋浓

    원빈%구위의%리걸지%정려화%한취강%웅지홍%양지홍%협기농

    雌激素受体β%融合蛋白%多克隆抗体 雌激素受體β%融閤蛋白%多剋隆抗體
    자격소수체β%융합단백%다극륭항체
    目的: 制备雌激素受体β多克隆抗体.方法: 从人乳腺cDNA文库中PCR扩增ERβ AF1结构域(1～144位氨基酸), DNA 重组插入原核表达质粒pGEX-KG, 转化大肠杆菌DH5α, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-ERβ AF1融合蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠, 制备鼠多抗血清.通过Western blot和免疫组织化学实验鉴定血清特异性和效价.结果: 成功构建了pGEX-KG/ERβ AF1原核表达载体, 转化DH5α后可高效表达融合蛋白GST-ERβ AF1, 免疫产生的ERβ多抗可特异检测ERβ真核表达载体转染人293T细胞及乳腺癌细胞中ERβ的表达.结论: 制备的ER 抗体对ERβ有反应原性, 效价高, 特异性好, 为进一步研究ERβ的生物学功能奠定基础.
    목적: 제비자격소수체β다극륭항체.방법: 종인유선cDNA문고중PCR확증ERβ AF1결구역(1～144위안기산), DNA 중조삽입원핵표체질립pGEX-KG, 전화대장간균DH5α, 이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체GST-ERβ AF1융합단백.순화후면역BALB/c소서, 제비서다항혈청.통과Western blot화면역조직화학실험감정혈청특이성화효개.결과: 성공구건료pGEX-KG/ERβ AF1원핵표체재체, 전화DH5α후가고효표체융합단백GST-ERβ AF1, 면역산생적ERβ다항가특이검측ERβ진핵표체재체전염인293T세포급유선암세포중ERβ적표체.결론: 제비적ER 항체대ERβ유반응원성, 효개고, 특이성호, 위진일보연구ERβ적생물학공능전정기출.
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