中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
5期
391-394
,共4页
徐国英%严延生%张志珊%李世清%王灵岚%邓艳琴%潘敏楠
徐國英%嚴延生%張誌珊%李世清%王靈嵐%鄧豔琴%潘敏楠
서국영%엄연생%장지산%리세청%왕령람%산염금%반민남
钩端螺旋体%外膜蛋白基因%基因表达%致病性
鉤耑螺鏇體%外膜蛋白基因%基因錶達%緻病性
구단라선체%외막단백기인%기인표체%치병성
目的 选取钩端螺旋体黄疸出血群(56601株)外膜脂蛋白LipL32进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于致病性钩体检测的纯化重组蛋白.方法 用PCR法扩增黄疸出血群(56601株)外膜脂蛋白LipL32基因,与表达载体pET-30a连接并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,免疫印迹(WB)鉴定活性后用电洗脱法进行纯化.将纯化的重组蛋白用间接和夹心ELISA法应用于22株兔免疫血清的检测,检测结果与钩体显微镜凝集试验(MAT)进行比较.结果 重组表达质粒在大肠杆菌中表达高产量的重组蛋白,WB结果显示重组蛋白具有免疫活性.纯化的重组蛋白对15株钩体标准致病株兔免疫血清全部检出,对7株腐生性钩体株兔免疫血清全部未检出,与MAT检测结果相符.结论 黄疸出血群(56601株)外膜脂蛋白LipL32基因在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白可应用于致病性钩体血清抗体的检测,为研制致病性钩体抗体检测试剂奠定了基础.
目的 選取鉤耑螺鏇體黃疸齣血群(56601株)外膜脂蛋白LipL32進行剋隆、錶達和純化,以穫得能應用于緻病性鉤體檢測的純化重組蛋白.方法 用PCR法擴增黃疸齣血群(56601株)外膜脂蛋白LipL32基因,與錶達載體pET-30a連接併在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達重組蛋白,免疫印跡(WB)鑒定活性後用電洗脫法進行純化.將純化的重組蛋白用間接和夾心ELISA法應用于22株兔免疫血清的檢測,檢測結果與鉤體顯微鏡凝集試驗(MAT)進行比較.結果 重組錶達質粒在大腸桿菌中錶達高產量的重組蛋白,WB結果顯示重組蛋白具有免疫活性.純化的重組蛋白對15株鉤體標準緻病株兔免疫血清全部檢齣,對7株腐生性鉤體株兔免疫血清全部未檢齣,與MAT檢測結果相符.結論 黃疸齣血群(56601株)外膜脂蛋白LipL32基因在大腸桿菌中成功錶達,重組蛋白可應用于緻病性鉤體血清抗體的檢測,為研製緻病性鉤體抗體檢測試劑奠定瞭基礎.
목적 선취구단라선체황달출혈군(56601주)외막지단백LipL32진행극륭、표체화순화,이획득능응용우치병성구체검측적순화중조단백.방법 용PCR법확증황달출혈군(56601주)외막지단백LipL32기인,여표체재체pET-30a련접병재대장간균BL21(DE3)중표체중조단백,면역인적(WB)감정활성후용전세탈법진행순화.장순화적중조단백용간접화협심ELISA법응용우22주토면역혈청적검측,검측결과여구체현미경응집시험(MAT)진행비교.결과 중조표체질립재대장간균중표체고산량적중조단백,WB결과현시중조단백구유면역활성.순화적중조단백대15주구체표준치병주토면역혈청전부검출,대7주부생성구체주토면역혈청전부미검출,여MAT검측결과상부.결론 황달출혈군(56601주)외막지단백LipL32기인재대장간균중성공표체,중조단백가응용우치병성구체혈청항체적검측,위연제치병성구체항체검측시제전정료기출.
