青岛大学医学院学报
青島大學醫學院學報
청도대학의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QINGDAO UNIVERSITATIS
2010年
4期
339-341,344
,共4页
寇晨光%曹成波%燕晓雯%罗兵%周岩冰
寇晨光%曹成波%燕曉雯%囉兵%週巖冰
구신광%조성파%연효문%라병%주암빙
肝细胞%枯否细胞%共同培养技术%清蛋白类%细胞因子类%大鼠
肝細胞%枯否細胞%共同培養技術%清蛋白類%細胞因子類%大鼠
간세포%고부세포%공동배양기술%청단백류%세포인자류%대서
目的 观察大鼠肝实质细胞与Kupffer细胞体外共同培养时对两者生长、形态及功能的影响.方法 采用原位二步Ⅳ型胶原灌注法、Percoll液密度梯度离心法分离Wistar大鼠肝实质细胞与Kupffer细胞;体外将肝实质细胞与Kupffer细胞按6∶1比例共同培养.观察不同情况下肝细胞生存时间和形态,每隔24 h检测培养上清液中清蛋白和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的水平,并在培养36 h用放免法检测上清液中白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)含量.结果 单独培养组肝细胞的生长、增殖迅速,并向正常肝细胞的形态演变,肝细胞可培养存活至15 d;共同培养组肝细胞生长增殖缓慢,细胞可培养存活至10 d.共同培养组上清液中清蛋白水平在24、36、48、60 h比单独培养组低(t=2.551～ 3.139,P<0.05);ALT、AST水平在24、36、48、60 h比单独培养组高(t=2.446～3.108,P<0.05);共同培养组Kupffer细胞保持IL-1、IL-6、TNF-α分泌功能,而单独培养组未检测到IL-1、IL-6、TNF-α.结论 大鼠Kupffer细胞和肝实质细胞在适宜的培养条件下可进行共同培养,二者可以保持良好的分泌功能,可用于实验研究.
目的 觀察大鼠肝實質細胞與Kupffer細胞體外共同培養時對兩者生長、形態及功能的影響.方法 採用原位二步Ⅳ型膠原灌註法、Percoll液密度梯度離心法分離Wistar大鼠肝實質細胞與Kupffer細胞;體外將肝實質細胞與Kupffer細胞按6∶1比例共同培養.觀察不同情況下肝細胞生存時間和形態,每隔24 h檢測培養上清液中清蛋白和穀丙轉氨酶(ALT)、穀草轉氨酶(AST)的水平,併在培養36 h用放免法檢測上清液中白細胞介素1(IL-1)、白細胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)含量.結果 單獨培養組肝細胞的生長、增殖迅速,併嚮正常肝細胞的形態縯變,肝細胞可培養存活至15 d;共同培養組肝細胞生長增殖緩慢,細胞可培養存活至10 d.共同培養組上清液中清蛋白水平在24、36、48、60 h比單獨培養組低(t=2.551～ 3.139,P<0.05);ALT、AST水平在24、36、48、60 h比單獨培養組高(t=2.446～3.108,P<0.05);共同培養組Kupffer細胞保持IL-1、IL-6、TNF-α分泌功能,而單獨培養組未檢測到IL-1、IL-6、TNF-α.結論 大鼠Kupffer細胞和肝實質細胞在適宜的培養條件下可進行共同培養,二者可以保持良好的分泌功能,可用于實驗研究.
목적 관찰대서간실질세포여Kupffer세포체외공동배양시대량자생장、형태급공능적영향.방법 채용원위이보Ⅳ형효원관주법、Percoll액밀도제도리심법분리Wistar대서간실질세포여Kupffer세포;체외장간실질세포여Kupffer세포안6∶1비례공동배양.관찰불동정황하간세포생존시간화형태,매격24 h검측배양상청액중청단백화곡병전안매(ALT)、곡초전안매(AST)적수평,병재배양36 h용방면법검측상청액중백세포개소1(IL-1)、백세포개소6(IL-6)、종류배사인자α (TNF-α)함량.결과 단독배양조간세포적생장、증식신속,병향정상간세포적형태연변,간세포가배양존활지15 d;공동배양조간세포생장증식완만,세포가배양존활지10 d.공동배양조상청액중청단백수평재24、36、48、60 h비단독배양조저(t=2.551～ 3.139,P<0.05);ALT、AST수평재24、36、48、60 h비단독배양조고(t=2.446～3.108,P<0.05);공동배양조Kupffer세포보지IL-1、IL-6、TNF-α분비공능,이단독배양조미검측도IL-1、IL-6、TNF-α.결론 대서Kupffer세포화간실질세포재괄의적배양조건하가진행공동배양,이자가이보지량호적분비공능,가용우실험연구.
