中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
4期
121-123
,共3页
蒋成砚%谢昆%罗家琴%柴俊%王生奎%张以芳
蔣成硯%謝昆%囉傢琴%柴俊%王生奎%張以芳
장성연%사곤%라가금%시준%왕생규%장이방
牛分支杆菌%抗原%ag85b%基因重组
牛分支桿菌%抗原%ag85b%基因重組
우분지간균%항원%ag85b%기인중조
为构建牛分支杆菌αg85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出αg85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 DNA Ligase连接,将靶基因克隆入载体pET-32a,构建重组质粒.将此重组质粒转化人大肠杆菌DH5α,抽提重组质粒首先经EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切检验,再进行PCR扩增鉴定,最后测序鉴定.酶切片段及PCR扩增片段大小均与预期相符,测序结果与GenBank登录序列完全相同.结果表明,成功地克隆并构建了αg85b基因重组表达质粒pET-32a-ag85b.
為構建牛分支桿菌αg85b基因的重組錶達質粒pET-32a-ag85b,採用聚閤酶鏈反應(PCR)從牛分支桿菌AF2122/97基因組DNA中擴增齣αg85b基因(978 bp),然後對擴增產物和載體pET-32a以覈痠內切酶EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ分彆進行雙酶切;將兩種酶切產物以T4 DNA Ligase連接,將靶基因剋隆入載體pET-32a,構建重組質粒.將此重組質粒轉化人大腸桿菌DH5α,抽提重組質粒首先經EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ雙酶切檢驗,再進行PCR擴增鑒定,最後測序鑒定.酶切片段及PCR擴增片段大小均與預期相符,測序結果與GenBank登錄序列完全相同.結果錶明,成功地剋隆併構建瞭αg85b基因重組錶達質粒pET-32a-ag85b.
위구건우분지간균αg85b기인적중조표체질립pET-32a-ag85b,채용취합매련반응(PCR)종우분지간균AF2122/97기인조DNA중확증출αg85b기인(978 bp),연후대확증산물화재체pET-32a이핵산내절매EcoR Ⅰ급Sal Ⅰ분별진행쌍매절;장량충매절산물이T4 DNA Ligase련접,장파기인극륭입재체pET-32a,구건중조질립.장차중조질립전화인대장간균DH5α,추제중조질립수선경EcoR Ⅰ급Sal Ⅰ쌍매절검험,재진행PCR확증감정,최후측서감정.매절편단급PCR확증편단대소균여예기상부,측서결과여GenBank등록서렬완전상동.결과표명,성공지극륭병구건료αg85b기인중조표체질립pET-32a-ag85b.
