微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2012年
1期
84-87
,共4页
刘兵%马晓宇%李响%罗恩杰
劉兵%馬曉宇%李響%囉恩傑
류병%마효우%리향%라은걸
乙型肝炎病毒表面抗原%scFv%T7噬菌体抗体库
乙型肝炎病毒錶麵抗原%scFv%T7噬菌體抗體庫
을형간염병독표면항원%scFv%T7서균체항체고
构建T7噬菌体单链抗体(scFv)库筛选抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体.从抗-HBs阳性患者外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA第1条链,PCR分别扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),经重叠延伸拼接(SOE)PCR组成scFv基因,并将其与T7噬菌体载体的2个臂相连接.体外包装后,在宿主菌BLT5403中,扩增重组噬菌体抗体库.以乙型肝炎病毒表面抗原进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,酶免疫实验检测抗体活性.所建抗体库库容为1.53×107,扩增后初级库滴度为2.42×1010pfu/mL.以乙型肝炎病毒表面抗原筛选后抗体出现特异性富集,经酶免疫实验鉴定,得到2株与HBsAg抗原特异结合的噬菌体抗体,成功构建了抗HBsAg蛋白T7噬菌体抗体库.
構建T7噬菌體單鏈抗體(scFv)庫篩選抗乙型肝炎病毒錶麵抗原抗體.從抗-HBs暘性患者外週血淋巴細胞中提取總RNA,反轉錄閤成cDNA第1條鏈,PCR分彆擴增抗體重鏈可變區基因(VH)和輕鏈可變區基因(VL),經重疊延伸拼接(SOE)PCR組成scFv基因,併將其與T7噬菌體載體的2箇臂相連接.體外包裝後,在宿主菌BLT5403中,擴增重組噬菌體抗體庫.以乙型肝炎病毒錶麵抗原進行4輪“吸附-洗脫-擴增”的篩選,酶免疫實驗檢測抗體活性.所建抗體庫庫容為1.53×107,擴增後初級庫滴度為2.42×1010pfu/mL.以乙型肝炎病毒錶麵抗原篩選後抗體齣現特異性富集,經酶免疫實驗鑒定,得到2株與HBsAg抗原特異結閤的噬菌體抗體,成功構建瞭抗HBsAg蛋白T7噬菌體抗體庫.
구건T7서균체단련항체(scFv)고사선항을형간염병독표면항원항체.종항-HBs양성환자외주혈림파세포중제취총RNA,반전록합성cDNA제1조련,PCR분별확증항체중련가변구기인(VH)화경련가변구기인(VL),경중첩연신병접(SOE)PCR조성scFv기인,병장기여T7서균체재체적2개비상련접.체외포장후,재숙주균BLT5403중,확증중조서균체항체고.이을형간염병독표면항원진행4륜“흡부-세탈-확증”적사선,매면역실험검측항체활성.소건항체고고용위1.53×107,확증후초급고적도위2.42×1010pfu/mL.이을형간염병독표면항원사선후항체출현특이성부집,경매면역실험감정,득도2주여HBsAg항원특이결합적서균체항체,성공구건료항HBsAg단백T7서균체항체고.
