国外医学(流行病学传染病学分册)
國外醫學(流行病學傳染病學分冊)
국외의학(류행병학전염병학분책)
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2005年
1期
11-15
,共5页
贺莉萍%郭毅%蒙艳斌%陈湘宜%蒲爱华
賀莉萍%郭毅%矇豔斌%陳湘宜%蒲愛華
하리평%곽의%몽염빈%진상의%포애화
组织保存%RNA病毒%石蜡包埋%固定剂
組織保存%RNA病毒%石蠟包埋%固定劑
조직보존%RNA병독%석사포매%고정제
目的探讨固定剂及固定时间对石蜡包埋RNA病毒感染组织中RNA降解及标本病理形态学的影响.方法取汉坦病毒76～118株接种的乳鼠感染组织,以沉淀脱水类固定剂100%甲醇、75%乙醇、100%丙酮以及醛类固定剂4%的多聚甲醛磷酸缓冲液(PFA)、10%福尔马林共5种固定剂,在室温下固定病毒感染组织6h、12h、24h和48h后,将各种方式固定后的病毒感染组织标本进行石蜡包埋,组织包埋块在室温下保存1年～1.5年,然后进行切片HE染色,镜下观察各种固定剂对组织病理形态学的影响.各种方式固定后石蜡包埋组织中以RT-PCR扩增出不同片段长度的病毒RNA及β-actin RNA序列,以判断各种固定方式对病毒RNA和细胞总RNA降解的影响.每种固定方法对RNA的影响是通过获得产物最大长度或对长片段扩增的可重复性及假阴性结果的多少来反映.结果病理切片结果显示,经10%福尔马林和4%PFA固定的石蜡切片,组织结构完整清晰,组织经其他三种沉淀脱水类固定剂固定后有不同程度收缩,但不影响组织病理形态学检测,其中甲醇固定的收缩程度最小.从固定后石蜡包埋组织中提取RNA进行RT-PCR扩增时,扩增的效果受固定剂类型和固定时间的影响,同时也受扩增的基因片段长度的影响.在可达到固定作用的前提下,同一固定剂固定时间越短,RT-PCR扩增结果越稳定;采用相同的固定时间从甲醇、乙醇及丙酮等沉淀类固定剂固定后石蜡包埋的病毒组织中扩增出病毒RNA的阳性结果比醛类剂高,可重复性好.尤其在进行长片段扩增时,在沉淀类固定剂固定的标本中出现假阴性现象比醛类固定剂固定的标本少.各种沉淀固定剂之间无明显区别.结论从固定后石蜡包埋组织标本中用RT-PCR检测病毒RNA进行回顾性研究是可行的,但受固定剂类型及固定持续时间的影响.临床在对存档的石蜡包埋组织作回顾性研究,解释其PCR阴性结果时,有必要考虑其组织标本固定对RNA分子的影响这一因素.
目的探討固定劑及固定時間對石蠟包埋RNA病毒感染組織中RNA降解及標本病理形態學的影響.方法取漢坦病毒76～118株接種的乳鼠感染組織,以沉澱脫水類固定劑100%甲醇、75%乙醇、100%丙酮以及醛類固定劑4%的多聚甲醛燐痠緩遲液(PFA)、10%福爾馬林共5種固定劑,在室溫下固定病毒感染組織6h、12h、24h和48h後,將各種方式固定後的病毒感染組織標本進行石蠟包埋,組織包埋塊在室溫下保存1年～1.5年,然後進行切片HE染色,鏡下觀察各種固定劑對組織病理形態學的影響.各種方式固定後石蠟包埋組織中以RT-PCR擴增齣不同片段長度的病毒RNA及β-actin RNA序列,以判斷各種固定方式對病毒RNA和細胞總RNA降解的影響.每種固定方法對RNA的影響是通過穫得產物最大長度或對長片段擴增的可重複性及假陰性結果的多少來反映.結果病理切片結果顯示,經10%福爾馬林和4%PFA固定的石蠟切片,組織結構完整清晰,組織經其他三種沉澱脫水類固定劑固定後有不同程度收縮,但不影響組織病理形態學檢測,其中甲醇固定的收縮程度最小.從固定後石蠟包埋組織中提取RNA進行RT-PCR擴增時,擴增的效果受固定劑類型和固定時間的影響,同時也受擴增的基因片段長度的影響.在可達到固定作用的前提下,同一固定劑固定時間越短,RT-PCR擴增結果越穩定;採用相同的固定時間從甲醇、乙醇及丙酮等沉澱類固定劑固定後石蠟包埋的病毒組織中擴增齣病毒RNA的暘性結果比醛類劑高,可重複性好.尤其在進行長片段擴增時,在沉澱類固定劑固定的標本中齣現假陰性現象比醛類固定劑固定的標本少.各種沉澱固定劑之間無明顯區彆.結論從固定後石蠟包埋組織標本中用RT-PCR檢測病毒RNA進行迴顧性研究是可行的,但受固定劑類型及固定持續時間的影響.臨床在對存檔的石蠟包埋組織作迴顧性研究,解釋其PCR陰性結果時,有必要攷慮其組織標本固定對RNA分子的影響這一因素.
목적탐토고정제급고정시간대석사포매RNA병독감염조직중RNA강해급표본병리형태학적영향.방법취한탄병독76～118주접충적유서감염조직,이침정탈수류고정제100%갑순、75%을순、100%병동이급철류고정제4%적다취갑철린산완충액(PFA)、10%복이마림공5충고정제,재실온하고정병독감염조직6h、12h、24h화48h후,장각충방식고정후적병독감염조직표본진행석사포매,조직포매괴재실온하보존1년～1.5년,연후진행절편HE염색,경하관찰각충고정제대조직병리형태학적영향.각충방식고정후석사포매조직중이RT-PCR확증출불동편단장도적병독RNA급β-actin RNA서렬,이판단각충고정방식대병독RNA화세포총RNA강해적영향.매충고정방법대RNA적영향시통과획득산물최대장도혹대장편단확증적가중복성급가음성결과적다소래반영.결과병리절편결과현시,경10%복이마림화4%PFA고정적석사절편,조직결구완정청석,조직경기타삼충침정탈수류고정제고정후유불동정도수축,단불영향조직병리형태학검측,기중갑순고정적수축정도최소.종고정후석사포매조직중제취RNA진행RT-PCR확증시,확증적효과수고정제류형화고정시간적영향,동시야수확증적기인편단장도적영향.재가체도고정작용적전제하,동일고정제고정시간월단,RT-PCR확증결과월은정;채용상동적고정시간종갑순、을순급병동등침정류고정제고정후석사포매적병독조직중확증출병독RNA적양성결과비철류제고,가중복성호.우기재진행장편단확증시,재침정류고정제고정적표본중출현가음성현상비철류고정제고정적표본소.각충침정고정제지간무명현구별.결론종고정후석사포매조직표본중용RT-PCR검측병독RNA진행회고성연구시가행적,단수고정제류형급고정지속시간적영향.림상재대존당적석사포매조직작회고성연구,해석기PCR음성결과시,유필요고필기조직표본고정대RNA분자적영향저일인소.
