中国公共卫生
中國公共衛生
중국공공위생
CHINA PUBLIC HEALTH
2004年
10期
1156-1158
,共3页
何东苟%余新炳%吴忠道%徐劲%吴德%胡旭初%陈守义
何東茍%餘新炳%吳忠道%徐勁%吳德%鬍旭初%陳守義
하동구%여신병%오충도%서경%오덕%호욱초%진수의
华支睾吸虫%表膜相关抗原%克隆
華支睪吸蟲%錶膜相關抗原%剋隆
화지고흡충%표막상관항원%극륭
目的通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因,并构建20.8?kDa华支睾吸虫表膜相关抗原(CSTA20.8)重组表达载体,为进一步研究其功能及其应用奠定基础.方法对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选,通过NCBI和ExPasy网站的Blast程序进行序列比对,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifscan、NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行结构域分析.将所发现的华支睾吸虫表膜相关抗原基因编码区定向克隆到原核及真核表达载体PGEX-4T-1和PcDNA3上,构建的PGEX-4T-1-CSTA20.8、PcDNA3-CSTA20.8重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实.结果发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因,完整阅读框含555个碱基,编码184个氨基酸,理论分子量为20.8kDa,理论pI为4.33.序列分析表明,华支睾吸虫CSTA20.8编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,CSTA20.8具有完整的钙结合蛋白保守功能域.所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符.结论发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因,并成功构建原核和真核重组表达质粒.
目的通過篩選cDNA文庫識彆華支睪吸蟲新基因,併構建20.8?kDa華支睪吸蟲錶膜相關抗原(CSTA20.8)重組錶達載體,為進一步研究其功能及其應用奠定基礎.方法對華支睪吸蟲cDNA文庫進行篩選,通過NCBI和ExPasy網站的Blast程序進行序列比對,識彆華支睪吸蟲新基因,併應用Motifscan、NCBI Conserved Domain Search等程序對其進行結構域分析.將所髮現的華支睪吸蟲錶膜相關抗原基因編碼區定嚮剋隆到原覈及真覈錶達載體PGEX-4T-1和PcDNA3上,構建的PGEX-4T-1-CSTA20.8、PcDNA3-CSTA20.8重組錶達質粒經PCR、雙酶切及測序證實.結果髮現華支睪吸蟲錶膜相關抗原基因,完整閱讀框含555箇堿基,編碼184箇氨基痠,理論分子量為20.8kDa,理論pI為4.33.序列分析錶明,華支睪吸蟲CSTA20.8編碼氨基痠序列與其它物種有較高的同源性,CSTA20.8具有完整的鈣結閤蛋白保守功能域.所構建的重組原覈和真覈錶達質粒經PCR、雙酶切及測序證實與目標基因相符.結論髮現華支睪吸蟲錶膜相關抗原基因,併成功構建原覈和真覈重組錶達質粒.
목적통과사선cDNA문고식별화지고흡충신기인,병구건20.8?kDa화지고흡충표막상관항원(CSTA20.8)중조표체재체,위진일보연구기공능급기응용전정기출.방법대화지고흡충cDNA문고진행사선,통과NCBI화ExPasy망참적Blast정서진행서렬비대,식별화지고흡충신기인,병응용Motifscan、NCBI Conserved Domain Search등정서대기진행결구역분석.장소발현적화지고흡충표막상관항원기인편마구정향극륭도원핵급진핵표체재체PGEX-4T-1화PcDNA3상,구건적PGEX-4T-1-CSTA20.8、PcDNA3-CSTA20.8중조표체질립경PCR、쌍매절급측서증실.결과발현화지고흡충표막상관항원기인,완정열독광함555개감기,편마184개안기산,이론분자량위20.8kDa,이론pI위4.33.서렬분석표명,화지고흡충CSTA20.8편마안기산서렬여기타물충유교고적동원성,CSTA20.8구유완정적개결합단백보수공능역.소구건적중조원핵화진핵표체질립경PCR、쌍매절급측서증실여목표기인상부.결론발현화지고흡충표막상관항원기인,병성공구건원핵화진핵중조표체질립.
