吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2007年
1期
17-20
,共4页
杨莉莉%贺巾超%董文%范伟全%凡炼炼%潘秦%牟旭鹏%颜炜群
楊莉莉%賀巾超%董文%範偉全%凡煉煉%潘秦%牟旭鵬%顏煒群
양리리%하건초%동문%범위전%범련련%반진%모욱붕%안위군
牛胰蛋白酶抑制剂%白蛋白信号肽%毕赤酵母
牛胰蛋白酶抑製劑%白蛋白信號肽%畢赤酵母
우이단백매억제제%백단백신호태%필적효모
目的:探讨在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效分泌表达具有天然N-端序列的rBPTI.方法:将白蛋白信号肽(hsasp)和bpti基因连接并构建真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti,电击转化毕赤酵母菌株X-33,用PCR法、SDS-PAGE和胰蛋白酶抑制活性分析筛选阳性转化菌.结果:转染pPICZ/hsasp-bpti的毕赤酵母X-33工程菌能够高效地分泌表达rBPTI;培养上清中rBPTI含量约200 mg·L-1;SDS-PAGE和质谱分析结果显示rBPTI相对分子质量分别为6 500和6 508;rBPTI的N-端测序结果表明其N-端15个氨基酸序列与天然BPTI完全一致;胰蛋白酶活性抑制分析结果表明,抑制常数Ki=(2.6±0.1)×10-9,与天然BPTI一致.结论:hsasp能够在毕赤酵母中高效地引导分泌表达天然N-端氨基酸序列的rBPTI,其表达量达200 mg·L-1.
目的:探討在畢赤酵母(Pichia pastoris)中高效分泌錶達具有天然N-耑序列的rBPTI.方法:將白蛋白信號肽(hsasp)和bpti基因連接併構建真覈錶達載體pPICZ/hsasp-bpti,電擊轉化畢赤酵母菌株X-33,用PCR法、SDS-PAGE和胰蛋白酶抑製活性分析篩選暘性轉化菌.結果:轉染pPICZ/hsasp-bpti的畢赤酵母X-33工程菌能夠高效地分泌錶達rBPTI;培養上清中rBPTI含量約200 mg·L-1;SDS-PAGE和質譜分析結果顯示rBPTI相對分子質量分彆為6 500和6 508;rBPTI的N-耑測序結果錶明其N-耑15箇氨基痠序列與天然BPTI完全一緻;胰蛋白酶活性抑製分析結果錶明,抑製常數Ki=(2.6±0.1)×10-9,與天然BPTI一緻.結論:hsasp能夠在畢赤酵母中高效地引導分泌錶達天然N-耑氨基痠序列的rBPTI,其錶達量達200 mg·L-1.
목적:탐토재필적효모(Pichia pastoris)중고효분비표체구유천연N-단서렬적rBPTI.방법:장백단백신호태(hsasp)화bpti기인련접병구건진핵표체재체pPICZ/hsasp-bpti,전격전화필적효모균주X-33,용PCR법、SDS-PAGE화이단백매억제활성분석사선양성전화균.결과:전염pPICZ/hsasp-bpti적필적효모X-33공정균능구고효지분비표체rBPTI;배양상청중rBPTI함량약200 mg·L-1;SDS-PAGE화질보분석결과현시rBPTI상대분자질량분별위6 500화6 508;rBPTI적N-단측서결과표명기N-단15개안기산서렬여천연BPTI완전일치;이단백매활성억제분석결과표명,억제상수Ki=(2.6±0.1)×10-9,여천연BPTI일치.결론:hsasp능구재필적효모중고효지인도분비표체천연N-단안기산서렬적rBPTI,기표체량체200 mg·L-1.
