南华大学学报（医学版）
南華大學學報（醫學版）
남화대학학보（의학판）
JOURNAL OF NANHUA UNIVERSITY(MEDICAL EDITION)
2009年
2期
133-135
,共3页
涂剑%吴海燕%姚志红%朱炳阳%唐圣松
塗劍%吳海燕%姚誌紅%硃炳暘%唐聖鬆
도검%오해연%요지홍%주병양%당골송
巨噬细胞集落刺激因子%靶向定位载体%HeLa细胞%胞质
巨噬細胞集落刺激因子%靶嚮定位載體%HeLa細胞%胞質
거서세포집락자격인자%파향정위재체%HeLa세포%포질
目的 构建真核细胞pCMV/cyto/myc-M-CSF载体,建立M-CSF胞质内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的胞内作用奠定基础. 方法 构建靶向定位载体pCMV/cyto/myc-M-CSF,PCR及双酶切鉴定后转染HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,RT-PCR和免疫细胞化学鉴定M-CSF的表达及M-CSF的蛋白定位. 结果 重组质粒pCMV/cyto/myc-M-CSF用M-CSF特异性的引物进行PCR扩增,结果 显示插入片段约为1 400 bp,双酶切后分别得到约5.0 kb和1 400 bp的两条带,M-CSF分子大小与预期一致.RT-PCR、免疫细胞化学结果 表明转染M-CSF的HeLa细胞高表达M-CSF(P<0.05),并且转染M-CSF的HeLa细胞表达的M-CSF蛋白定位于细胞质. 结论 成功构建了稳定高表达胞质M-CSF的HeLa细胞系.
目的 構建真覈細胞pCMV/cyto/myc-M-CSF載體,建立M-CSF胞質內穩定錶達細胞繫,為進一步研究M-CSF的胞內作用奠定基礎. 方法 構建靶嚮定位載體pCMV/cyto/myc-M-CSF,PCR及雙酶切鑒定後轉染HeLa細胞,G418篩選暘性剋隆,RT-PCR和免疫細胞化學鑒定M-CSF的錶達及M-CSF的蛋白定位. 結果 重組質粒pCMV/cyto/myc-M-CSF用M-CSF特異性的引物進行PCR擴增,結果 顯示插入片段約為1 400 bp,雙酶切後分彆得到約5.0 kb和1 400 bp的兩條帶,M-CSF分子大小與預期一緻.RT-PCR、免疫細胞化學結果 錶明轉染M-CSF的HeLa細胞高錶達M-CSF(P<0.05),併且轉染M-CSF的HeLa細胞錶達的M-CSF蛋白定位于細胞質. 結論 成功構建瞭穩定高錶達胞質M-CSF的HeLa細胞繫.
목적 구건진핵세포pCMV/cyto/myc-M-CSF재체,건립M-CSF포질내은정표체세포계,위진일보연구M-CSF적포내작용전정기출. 방법 구건파향정위재체pCMV/cyto/myc-M-CSF,PCR급쌍매절감정후전염HeLa세포,G418사선양성극륭,RT-PCR화면역세포화학감정M-CSF적표체급M-CSF적단백정위. 결과 중조질립pCMV/cyto/myc-M-CSF용M-CSF특이성적인물진행PCR확증,결과 현시삽입편단약위1 400 bp,쌍매절후분별득도약5.0 kb화1 400 bp적량조대,M-CSF분자대소여예기일치.RT-PCR、면역세포화학결과 표명전염M-CSF적HeLa세포고표체M-CSF(P<0.05),병차전염M-CSF적HeLa세포표체적M-CSF단백정위우세포질. 결론 성공구건료은정고표체포질M-CSF적HeLa세포계.
