农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
3期
562-566
,共5页
廖文军%覃绍敏%吴健敏%王仰杰%白安斌%覃建飞
廖文軍%覃紹敏%吳健敏%王仰傑%白安斌%覃建飛
료문군%담소민%오건민%왕앙걸%백안빈%담건비
猪伪狂犬病毒%gE基因%抗人红细胞单链抗体%原核表达
豬偽狂犬病毒%gE基因%抗人紅細胞單鏈抗體%原覈錶達
저위광견병독%gE기인%항인홍세포단련항체%원핵표체
利用特异性引物从重组质粒pMD-2E8ScFv和pMD-gE中PCR扩增出2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和kgE基因(PRVgE主要抗原编码区),采用重叠延伸(SOE)PCR法拼接成融合的双功能分子2E8kgE,经BamH I和EcoR I双酶切,纯化后,克隆至BamH I和EcoR I双酶切的表达载体pET-Trx中,构建了原核表达载体pET-Trx-2E8kgE;将pET-Trx-2E8kgE转化至BL21plysS中,在IPTG诱导下表达具有双功能的融合蛋白,经过SDS-PAGE和Western-blot检测;结果表明,重组菌BL21plysS表达出约60.1 kD的目的蛋白,与猪伪狂犬标准阳性血清发生特异性反应.红细胞凝集试验证实,2E8kgE融合蛋白既能够与人红细胞结合,又能够与PRV抗体反应,具有双功能特性.
利用特異性引物從重組質粒pMD-2E8ScFv和pMD-gE中PCR擴增齣2E8基因(抗人紅細胞H抗原單鏈抗體基因)和kgE基因(PRVgE主要抗原編碼區),採用重疊延伸(SOE)PCR法拼接成融閤的雙功能分子2E8kgE,經BamH I和EcoR I雙酶切,純化後,剋隆至BamH I和EcoR I雙酶切的錶達載體pET-Trx中,構建瞭原覈錶達載體pET-Trx-2E8kgE;將pET-Trx-2E8kgE轉化至BL21plysS中,在IPTG誘導下錶達具有雙功能的融閤蛋白,經過SDS-PAGE和Western-blot檢測;結果錶明,重組菌BL21plysS錶達齣約60.1 kD的目的蛋白,與豬偽狂犬標準暘性血清髮生特異性反應.紅細胞凝集試驗證實,2E8kgE融閤蛋白既能夠與人紅細胞結閤,又能夠與PRV抗體反應,具有雙功能特性.
이용특이성인물종중조질립pMD-2E8ScFv화pMD-gE중PCR확증출2E8기인(항인홍세포H항원단련항체기인)화kgE기인(PRVgE주요항원편마구),채용중첩연신(SOE)PCR법병접성융합적쌍공능분자2E8kgE,경BamH I화EcoR I쌍매절,순화후,극륭지BamH I화EcoR I쌍매절적표체재체pET-Trx중,구건료원핵표체재체pET-Trx-2E8kgE;장pET-Trx-2E8kgE전화지BL21plysS중,재IPTG유도하표체구유쌍공능적융합단백,경과SDS-PAGE화Western-blot검측;결과표명,중조균BL21plysS표체출약60.1 kD적목적단백,여저위광견표준양성혈청발생특이성반응.홍세포응집시험증실,2E8kgE융합단백기능구여인홍세포결합,우능구여PRV항체반응,구유쌍공능특성.
