中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2010年
10期
919-922
,共4页
覃晓琳%刘朝奇%唐国慧%金羽
覃曉琳%劉朝奇%唐國慧%金羽
담효림%류조기%당국혜%금우
mPD-1%蛋白表达%抗体%免疫原性
mPD-1%蛋白錶達%抗體%免疫原性
mPD-1%단백표체%항체%면역원성
目的:原核表达并纯化小鼠PD-1膜外区(以下简称mPD-1)蛋白,制备其多克隆抗体.方法:原核表达质粒pGEX-4T-1/mPD-1转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白的表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测.利用蛋白质纯化仪纯化蛋白.使用纯化蛋白免疫日本大耳白兔3次后,分离抗血清,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度.用其制备的多克隆抗体通过细胞免疫荧光方法(CIF)和FCM检测高表达PD-1全长基因的L929细胞.结果:诱导表达并纯化了GST-mPD-1重组蛋白,得到相对分子质量(Mr)约42 000的mPD-1蛋白.纯化蛋白免疫动物后,产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1∶1 562 500).CIF和FCM结果显示抗血清与L929细胞表面PD-1有高度的特异性结合活性.结论:成功获得高纯度的mPD-1重组蛋白,免疫动物后,获得了特异、高效价的抗体,为将mPD-1蛋白及抗体用于PD-1的生物学研究及抗肿瘤治疗的实验研究奠定了基础.
目的:原覈錶達併純化小鼠PD-1膜外區(以下簡稱mPD-1)蛋白,製備其多剋隆抗體.方法:原覈錶達質粒pGEX-4T-1/mPD-1轉化大腸桿菌E.coli BL21(DE3),IPTG誘導重組蛋白的錶達.對錶達產物進行SDS-PAGE電泳和Western blot檢測.利用蛋白質純化儀純化蛋白.使用純化蛋白免疫日本大耳白兔3次後,分離抗血清,ELISA法測定兔多剋隆抗體滴度.用其製備的多剋隆抗體通過細胞免疫熒光方法(CIF)和FCM檢測高錶達PD-1全長基因的L929細胞.結果:誘導錶達併純化瞭GST-mPD-1重組蛋白,得到相對分子質量(Mr)約42 000的mPD-1蛋白.純化蛋白免疫動物後,產生特異的高滴度抗體(ELISA滴度達1∶1 562 500).CIF和FCM結果顯示抗血清與L929細胞錶麵PD-1有高度的特異性結閤活性.結論:成功穫得高純度的mPD-1重組蛋白,免疫動物後,穫得瞭特異、高效價的抗體,為將mPD-1蛋白及抗體用于PD-1的生物學研究及抗腫瘤治療的實驗研究奠定瞭基礎.
목적:원핵표체병순화소서PD-1막외구(이하간칭mPD-1)단백,제비기다극륭항체.방법:원핵표체질립pGEX-4T-1/mPD-1전화대장간균E.coli BL21(DE3),IPTG유도중조단백적표체.대표체산물진행SDS-PAGE전영화Western blot검측.이용단백질순화의순화단백.사용순화단백면역일본대이백토3차후,분리항혈청,ELISA법측정토다극륭항체적도.용기제비적다극륭항체통과세포면역형광방법(CIF)화FCM검측고표체PD-1전장기인적L929세포.결과:유도표체병순화료GST-mPD-1중조단백,득도상대분자질량(Mr)약42 000적mPD-1단백.순화단백면역동물후,산생특이적고적도항체(ELISA적도체1∶1 562 500).CIF화FCM결과현시항혈청여L929세포표면PD-1유고도적특이성결합활성.결론:성공획득고순도적mPD-1중조단백,면역동물후,획득료특이、고효개적항체,위장mPD-1단백급항체용우PD-1적생물학연구급항종류치료적실험연구전정료기출.
