CAJ | 학술논문

目的:探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK1)和ROCK2在缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用.方法:原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.将ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染细胞,48 h后给予缺氧6 h处理.实验分为5组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+阴性对照shRNA组;(4)缺氧+ROCK1-shRNA组;(5)缺氧+ROCK2-shRNA组.用倒置显微镜观察心肌细胞搏动频率与节律;用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量;用MTT检测细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用Western blotting检测ROCK1和ROCK2的表达,并检测caspase-3和p-PI3K的表达情况.结果:鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功.缺氧损伤后心肌细胞搏动频率较对照组明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01).全自动生化分析仪检测发现,缺氧能导致细胞培养液LDH含量升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.01).MTT检测发现,缺氧能导致心肌细胞存活率降低(P<0.05),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05).流式细胞仪检测发现,缺氧能导致心肌细胞凋亡率升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01).Western blotting检测发现,ROCK1-shRNA的转染能降低ROCK1的表达(P<0.05),ROCK2-shRNA的转染能降低ROCK2的表达(P<0.01);缺氧能导致caspase-3表达升高(P<0.05)、p-PI3K表达降低(P<0.01),ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01).结论:ROCK1和ROCK2表达下调能抑制缺氧损伤导致的大鼠心肌细胞凋亡,其机制与抑制caspase-3活化和增强p-PI3K的表达有关.
목적:탐토Rho상관적권곡단백격매(ROCK1)화ROCK2재결양유도적대서심기세포조망중적작용.방법:원대배양대서심기세포,병용항α-횡문기기동단백면역조화법진행감정.장ROCK1-shRNA화ROCK2-shRNA순시전염세포,48 h후급여결양6 h처리.실험분위5조:(1)공백대조조;(2)결양조;(3)결양+음성대조shRNA조;(4)결양+ROCK1-shRNA조;(5)결양+ROCK2-shRNA조.용도치현미경관찰심기세포박동빈솔여절률;용전자동생화분석의측정세포배양액중유산탈경매(LDH)함량;용MTT검측세포존활솔;용류식세포의검측세포조망솔;용Western blotting검측ROCK1화ROCK2적표체,병검측caspase-3화p-PI3K적표체정황.결과:감정증실대서심기세포원대배양성공.결양손상후심기세포박동빈솔교대조조명현감만,박동폭도감약,절률불규정(P<0.01),이ROCK1-shRNA화ROCK2-shRNA적전염능억제결양도치적저일작용(P<0.05혹P<0.01).전자동생화분석의검측발현,결양능도치세포배양액LDH함량승고(P<0.01),이ROCK1-shRNA화ROCK2-shRNA적전염능억제결양도치적저일작용(P<0.01).MTT검측발현,결양능도치심기세포존활솔강저(P<0.05),이ROCK1-shRNA화ROCK2-shRNA적전염능억제결양도치적저일작용(P<0.05).류식세포의검측발현,결양능도치심기세포조망솔승고(P<0.01),이ROCK1-shRNA화ROCK2-shRNA적전염능억제결양도치적저일작용(P<0.05혹P<0.01).Western blotting검측발현,ROCK1-shRNA적전염능강저ROCK1적표체(P<0.05),ROCK2-shRNA적전염능강저ROCK2적표체(P<0.01);결양능도치caspase-3표체승고(P<0.05)、p-PI3K표체강저(P<0.01),ROCK1-shRNA화ROCK2-shRNA적전염능억제결양도치적저일작용(P<0.05혹P<0.01).결론:ROCK1화ROCK2표체하조능억제결양손상도치적대서심기세포조망,기궤제여억제caspase-3활화화증강p-PI3K적표체유관.