首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2012年
2期
227-232
,共6页
武文琦%丛旭珍%殷爱红%胡家%翟方丽%李慎涛
武文琦%叢旭珍%慇愛紅%鬍傢%翟方麗%李慎濤
무문기%총욱진%은애홍%호가%적방려%리신도
变异链球菌%核糖-5-磷酸异构酶A%融合蛋白%原核表达%蛋白纯化
變異鏈毬菌%覈糖-5-燐痠異構酶A%融閤蛋白%原覈錶達%蛋白純化
변이련구균%핵당-5-린산이구매A%융합단백%원핵표체%단백순화
目的 在大肠杆菌中高效表达变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A( ribose 5-phosphate isomerase A,rpiA ),并对表达产物进行纯化和鉴定.方法 根据GenBank中变异链球菌UA159株基因组rpiA的DNA编码序列,设计PCR引物,扩增变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的DNA编码序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21 (DE3)中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达；对培养温度、IPTG用量、诱导时间等条件进行了优化；用亲和层析、离子交换层析纯化目标蛋白；用SDS-PAGE和质谱对目标蛋白进行鉴定.结果 变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白.经过纯化,得到纯度高达95％的变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A.结论 成功地在大肠杆菌中高效表达了变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究变异链球菌属核糖-5-磷酸异构酶蛋白的生物学活性及功能奠定了基础.
目的 在大腸桿菌中高效錶達變異鏈毬菌覈糖-5-燐痠異構酶A( ribose 5-phosphate isomerase A,rpiA ),併對錶達產物進行純化和鑒定.方法 根據GenBank中變異鏈毬菌UA159株基因組rpiA的DNA編碼序列,設計PCR引物,擴增變異鏈毬菌覈糖-5-燐痠異構酶A的DNA編碼序列,將其剋隆至pGEX-6p-1載體中,構建重組質粒,將測序正確的重組質粒轉化入大腸桿菌BL21 (DE3)中,用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)誘導錶達；對培養溫度、IPTG用量、誘導時間等條件進行瞭優化；用親和層析、離子交換層析純化目標蛋白；用SDS-PAGE和質譜對目標蛋白進行鑒定.結果 變異鏈毬菌覈糖-5-燐痠異構酶A在大腸桿菌中高效、可溶性錶達,經質譜鑒定及SDS-PAGE分析,錶達產物為變異鏈毬菌覈糖-5-燐痠異構酶A蛋白.經過純化,得到純度高達95％的變異鏈毬菌覈糖-5-燐痠異構酶A.結論 成功地在大腸桿菌中高效錶達瞭變異鏈毬菌覈糖-5-燐痠異構酶A蛋白,併建立瞭純化工藝,得到高純度的重組蛋白,為進一步研究變異鏈毬菌屬覈糖-5-燐痠異構酶蛋白的生物學活性及功能奠定瞭基礎.
목적 재대장간균중고효표체변이련구균핵당-5-린산이구매A( ribose 5-phosphate isomerase A,rpiA ),병대표체산물진행순화화감정.방법 근거GenBank중변이련구균UA159주기인조rpiA적DNA편마서렬,설계PCR인물,확증변이련구균핵당-5-린산이구매A적DNA편마서렬,장기극륭지pGEX-6p-1재체중,구건중조질립,장측서정학적중조질립전화입대장간균BL21 (DE3)중,용이병기-β-D-류대필남반유당감(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)유도표체；대배양온도、IPTG용량、유도시간등조건진행료우화；용친화층석、리자교환층석순화목표단백；용SDS-PAGE화질보대목표단백진행감정.결과 변이련구균핵당-5-린산이구매A재대장간균중고효、가용성표체,경질보감정급SDS-PAGE분석,표체산물위변이련구균핵당-5-린산이구매A단백.경과순화,득도순도고체95％적변이련구균핵당-5-린산이구매A.결론 성공지재대장간균중고효표체료변이련구균핵당-5-린산이구매A단백,병건립료순화공예,득도고순도적중조단백,위진일보연구변이련구균속핵당-5-린산이구매단백적생물학활성급공능전정료기출.
