华东理工大学学报（自然科学版）
華東理工大學學報（自然科學版）
화동리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF EAST CHINA UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE)
2005年
2期
249-252
,共4页
王锦之%周卿%周宇荀%马昱澍%魏东芝
王錦之%週卿%週宇荀%馬昱澍%魏東芝
왕금지%주경%주우순%마욱주%위동지
B淋巴细胞刺激因子%大肠杆菌%克隆和表达%丝裂霉素%协同作用
B淋巴細胞刺激因子%大腸桿菌%剋隆和錶達%絲裂黴素%協同作用
B림파세포자격인자%대장간균%극륭화표체%사렬매소%협동작용
聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134-285AA)的cDNA片段,该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体.测序表明除(ATA263→ATG263)突变并导致了氨基酸(1263M)突变外,其余序列与Genbank报道的序列一致.蛋白表达用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE表明:在33 ku处有明显的融合蛋白表达,其表达水平高达总菌体蛋白的50%.点印迹证实融合蛋白能与anti-His6Tag抗体反应.生物学活性研究表明BLys协同丝裂霉素能明显地抑制HeLa细胞的生长.
聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增穫得瞭編碼BLys(134-285AA)的cDNA片段,該片段以限製性內切酶BglⅡ和HindⅢ雙酶切插入pET32a載體.測序錶明除(ATA263→ATG263)突變併導緻瞭氨基痠(1263M)突變外,其餘序列與Genbank報道的序列一緻.蛋白錶達用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導,SDS-PAGE錶明:在33 ku處有明顯的融閤蛋白錶達,其錶達水平高達總菌體蛋白的50%.點印跡證實融閤蛋白能與anti-His6Tag抗體反應.生物學活性研究錶明BLys協同絲裂黴素能明顯地抑製HeLa細胞的生長.
취합매련식반응(PCR)확증획득료편마BLys(134-285AA)적cDNA편단,해편단이한제성내절매BglⅡ화HindⅢ쌍매절삽입pET32a재체.측서표명제(ATA263→ATG263)돌변병도치료안기산(1263M)돌변외,기여서렬여Genbank보도적서렬일치.단백표체용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도,SDS-PAGE표명:재33 ku처유명현적융합단백표체,기표체수평고체총균체단백적50%.점인적증실융합단백능여anti-His6Tag항체반응.생물학활성연구표명BLys협동사렬매소능명현지억제HeLa세포적생장.
