第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2005年
8期
676-678
,共3页
马龙洋%刘家云%许彦鸣%贾林涛%王成济%杨安钢
馬龍洋%劉傢雲%許彥鳴%賈林濤%王成濟%楊安鋼
마룡양%류가운%허언명%가림도%왕성제%양안강
RNA干扰%增强型绿色荧光蛋白%COS-7细胞系
RNA榦擾%增彊型綠色熒光蛋白%COS-7細胞繫
RNA간우%증강형록색형광단백%COS-7세포계
目的: 构建针对增强型(EGFP)的pSUPER siRNA(small interferencing RNA)表达载体,并在哺乳动物细胞COS-7细胞中观察其干扰效果.方法: 设计针对EGFP编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BglⅡ和HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSUPER中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.通过脂质体介导,将重组干扰质粒与pIRESE2-EGFP瞬时共转染COS-7细胞,48 h后荧光显微镜下观察干扰效果.结果: 经酶切鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中已插入了目的基因片段.瞬时共转染后荧光显微镜观察结果显示: 只转染pIRES2-EGFP及共转染pIRES2-EGFP和空载体pSUPER 的COS-7细胞中有大量的EGFP表达.而共转染pIRES2-EGFP和pSUPER-R237、pSUPER-R304、pSUPER-R447的COS-7细胞中发出荧光的细胞数量明显减少,荧光强度也明显降低.结论: 成功构建了针对EGFP的RNA干扰表达载体pSUPER-R237,pSUPER-R304和pSUPER-R447,并与pIRESE2-EGFP瞬时共转染COS-7细胞,有效地抑制了EGFP在哺乳动物细胞中的表达.
目的: 構建針對增彊型(EGFP)的pSUPER siRNA(small interferencing RNA)錶達載體,併在哺乳動物細胞COS-7細胞中觀察其榦擾效果.方法: 設計針對EGFP編碼區的寡覈苷痠鏈,體外退火後剋隆入經BglⅡ和HindⅢ雙酶切線性化的榦擾載體pSUPER中,對重組質粒進行酶切分析和DNA序列測定.通過脂質體介導,將重組榦擾質粒與pIRESE2-EGFP瞬時共轉染COS-7細胞,48 h後熒光顯微鏡下觀察榦擾效果.結果: 經酶切鑒定及DNA序列測定證實,重組質粒中已插入瞭目的基因片段.瞬時共轉染後熒光顯微鏡觀察結果顯示: 隻轉染pIRES2-EGFP及共轉染pIRES2-EGFP和空載體pSUPER 的COS-7細胞中有大量的EGFP錶達.而共轉染pIRES2-EGFP和pSUPER-R237、pSUPER-R304、pSUPER-R447的COS-7細胞中髮齣熒光的細胞數量明顯減少,熒光彊度也明顯降低.結論: 成功構建瞭針對EGFP的RNA榦擾錶達載體pSUPER-R237,pSUPER-R304和pSUPER-R447,併與pIRESE2-EGFP瞬時共轉染COS-7細胞,有效地抑製瞭EGFP在哺乳動物細胞中的錶達.
목적: 구건침대증강형(EGFP)적pSUPER siRNA(small interferencing RNA)표체재체,병재포유동물세포COS-7세포중관찰기간우효과.방법: 설계침대EGFP편마구적과핵감산련,체외퇴화후극륭입경BglⅡ화HindⅢ쌍매절선성화적간우재체pSUPER중,대중조질립진행매절분석화DNA서렬측정.통과지질체개도,장중조간우질립여pIRESE2-EGFP순시공전염COS-7세포,48 h후형광현미경하관찰간우효과.결과: 경매절감정급DNA서렬측정증실,중조질립중이삽입료목적기인편단.순시공전염후형광현미경관찰결과현시: 지전염pIRES2-EGFP급공전염pIRES2-EGFP화공재체pSUPER 적COS-7세포중유대량적EGFP표체.이공전염pIRES2-EGFP화pSUPER-R237、pSUPER-R304、pSUPER-R447적COS-7세포중발출형광적세포수량명현감소,형광강도야명현강저.결론: 성공구건료침대EGFP적RNA간우표체재체pSUPER-R237,pSUPER-R304화pSUPER-R447,병여pIRESE2-EGFP순시공전염COS-7세포,유효지억제료EGFP재포유동물세포중적표체.
