江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
2期
339-343
,共5页
宋亚鹏%陈红英%崔保安%贾艳艳%郭显坡%张蕾
宋亞鵬%陳紅英%崔保安%賈豔豔%郭顯坡%張蕾
송아붕%진홍영%최보안%가염염%곽현파%장뢰
犬%IFN-α%扩增%基因克隆%序列分析
犬%IFN-α%擴增%基因剋隆%序列分析
견%IFN-α%확증%기인극륭%서렬분석
参照基因库中收录的犬α-干扰素基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从贵宾犬肝组织基因组DNA中扩增IFN-α基因,将回收得到的特异性片段克隆于pGEM-T Easy载体中,转化感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选,质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性重组质粒,测定其核苷酸序列.测序结果表明,贵宾犬α-干扰素基因全长为564 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸.用DNAStar软件将所得序列与人和其他种动物的IFN-α基因进行核苷酸及氨基酸同源性比较,并通过绘制系统进化树可知,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高.
參照基因庫中收錄的犬α-榦擾素基因序列設計1對引物,應用PCR技術直接從貴賓犬肝組織基因組DNA中擴增IFN-α基因,將迴收得到的特異性片段剋隆于pGEM-T Easy載體中,轉化感受態細胞DH5α,經藍白斑篩選,質粒PCR鑒定及酶切鑒定篩選暘性重組質粒,測定其覈苷痠序列.測序結果錶明,貴賓犬α-榦擾素基因全長為564 bp,包含一箇完整的開放閱讀框,編碼187箇氨基痠的多肽,推導氨基痠序列有3箇潛在的N-糖基化位點,有10箇與二硫鍵形成有關的半胱氨痠.用DNAStar軟件將所得序列與人和其他種動物的IFN-α基因進行覈苷痠及氨基痠同源性比較,併通過繪製繫統進化樹可知,IFN-α基因存在種屬的差異性,親緣關繫越近,同源性越高.
삼조기인고중수록적견α-간우소기인서렬설계1대인물,응용PCR기술직접종귀빈견간조직기인조DNA중확증IFN-α기인,장회수득도적특이성편단극륭우pGEM-T Easy재체중,전화감수태세포DH5α,경람백반사선,질립PCR감정급매절감정사선양성중조질립,측정기핵감산서렬.측서결과표명,귀빈견α-간우소기인전장위564 bp,포함일개완정적개방열독광,편마187개안기산적다태,추도안기산서렬유3개잠재적N-당기화위점,유10개여이류건형성유관적반광안산.용DNAStar연건장소득서렬여인화기타충동물적IFN-α기인진행핵감산급안기산동원성비교,병통과회제계통진화수가지,IFN-α기인존재충속적차이성,친연관계월근,동원성월고.
