高校化学工程学报
高校化學工程學報
고교화학공정학보
JOURNAL OF CHEMICAL ENGINEERING OF CHINESE UNIVERSITIES
2010年
5期
808-818
,共11页
范秀波%宋克东%刘天庆%殷轶群%郝永杰%马学虎%崔占峰
範秀波%宋剋東%劉天慶%慇軼群%郝永傑%馬學虎%崔佔峰
범수파%송극동%류천경%은질군%학영걸%마학호%최점봉
脐带血%造血干细胞%间充质肝细胞%生物反应器%扩增%收获
臍帶血%造血榦細胞%間充質肝細胞%生物反應器%擴增%收穫
제대혈%조혈간세포%간충질간세포%생물반응기%확증%수획
目的为利用生物反应器,实现脐带血(Umbilical cord blood,UCB)来源的造血干细胞(Hematopoiefic stem cells,HSCs)与间充质干细胞(Mcsenchymal stem cells,MSCs)的同时扩增与收获.方法为在不添加血清、只添加细胞因子组合(SCF 15 ng·mL-1,FL 5 ng·mL-1,TPO 6 ng·mL-1,IL-3 15 ng·mL-1,G-CSF 1 ng·mL-1,GM-CSF 5 ng·mL-1)及海藻酸钙壳聚糖胶珠包被基质细胞支持的条件下,采用玻璃包被的聚苯乙烯(Glass coated styrene copolymer,GCSC)微载体与生物反应器相结合的策略,考察了UCB-HSCs与UCB-MSCs在转瓶及旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel bioreactor,RWVB)内的共培养.结果 RWVB中的扩增效果最佳,12天内有核细胞(Nuclear cells,NCs)扩增了3.7+0_3倍;集落形成细胞(Colony-formingunitsinculture,CFU-Cs)扩增了5.1±1.2倍;CD34+CD45+CDl05-(HSCs)细胞扩增了5.2±0.4倍;CD34-CD45-CD105+(MSCs)细胞扩增了13.9±1.2倍.培养结束后,通过自由沉降的方法分离UCB-HSCs和粘附在GCSC微载体表面的UCB-MSCs.同时,细胞多向诱导分化及免疫表型分析结果显示,粘附在GCSC微载体表面上的细胞能够向骨、软骨及脂肪细胞分化;并能够表达间质细胞相关表面标志CD13,CD44,CD73和CD105,而不表达造血细胞的相关表面标志CD34,CIM5及HLA-DR,与骨髓MSCs相一致.结论为添加细胞因子、基质细胞及微载体支持的条件下,在生物反应器内能够实现UCB-HSCs和UCB-MSCs的同时扩增与收获.
目的為利用生物反應器,實現臍帶血(Umbilical cord blood,UCB)來源的造血榦細胞(Hematopoiefic stem cells,HSCs)與間充質榦細胞(Mcsenchymal stem cells,MSCs)的同時擴增與收穫.方法為在不添加血清、隻添加細胞因子組閤(SCF 15 ng·mL-1,FL 5 ng·mL-1,TPO 6 ng·mL-1,IL-3 15 ng·mL-1,G-CSF 1 ng·mL-1,GM-CSF 5 ng·mL-1)及海藻痠鈣殼聚糖膠珠包被基質細胞支持的條件下,採用玻璃包被的聚苯乙烯(Glass coated styrene copolymer,GCSC)微載體與生物反應器相結閤的策略,攷察瞭UCB-HSCs與UCB-MSCs在轉瓶及鏇轉壁式生物反應器(Rotating wall vessel bioreactor,RWVB)內的共培養.結果 RWVB中的擴增效果最佳,12天內有覈細胞(Nuclear cells,NCs)擴增瞭3.7+0_3倍;集落形成細胞(Colony-formingunitsinculture,CFU-Cs)擴增瞭5.1±1.2倍;CD34+CD45+CDl05-(HSCs)細胞擴增瞭5.2±0.4倍;CD34-CD45-CD105+(MSCs)細胞擴增瞭13.9±1.2倍.培養結束後,通過自由沉降的方法分離UCB-HSCs和粘附在GCSC微載體錶麵的UCB-MSCs.同時,細胞多嚮誘導分化及免疫錶型分析結果顯示,粘附在GCSC微載體錶麵上的細胞能夠嚮骨、軟骨及脂肪細胞分化;併能夠錶達間質細胞相關錶麵標誌CD13,CD44,CD73和CD105,而不錶達造血細胞的相關錶麵標誌CD34,CIM5及HLA-DR,與骨髓MSCs相一緻.結論為添加細胞因子、基質細胞及微載體支持的條件下,在生物反應器內能夠實現UCB-HSCs和UCB-MSCs的同時擴增與收穫.
목적위이용생물반응기,실현제대혈(Umbilical cord blood,UCB)래원적조혈간세포(Hematopoiefic stem cells,HSCs)여간충질간세포(Mcsenchymal stem cells,MSCs)적동시확증여수획.방법위재불첨가혈청、지첨가세포인자조합(SCF 15 ng·mL-1,FL 5 ng·mL-1,TPO 6 ng·mL-1,IL-3 15 ng·mL-1,G-CSF 1 ng·mL-1,GM-CSF 5 ng·mL-1)급해조산개각취당효주포피기질세포지지적조건하,채용파리포피적취분을희(Glass coated styrene copolymer,GCSC)미재체여생물반응기상결합적책략,고찰료UCB-HSCs여UCB-MSCs재전병급선전벽식생물반응기(Rotating wall vessel bioreactor,RWVB)내적공배양.결과 RWVB중적확증효과최가,12천내유핵세포(Nuclear cells,NCs)확증료3.7+0_3배;집락형성세포(Colony-formingunitsinculture,CFU-Cs)확증료5.1±1.2배;CD34+CD45+CDl05-(HSCs)세포확증료5.2±0.4배;CD34-CD45-CD105+(MSCs)세포확증료13.9±1.2배.배양결속후,통과자유침강적방법분리UCB-HSCs화점부재GCSC미재체표면적UCB-MSCs.동시,세포다향유도분화급면역표형분석결과현시,점부재GCSC미재체표면상적세포능구향골、연골급지방세포분화;병능구표체간질세포상관표면표지CD13,CD44,CD73화CD105,이불표체조혈세포적상관표면표지CD34,CIM5급HLA-DR,여골수MSCs상일치.결론위첨가세포인자、기질세포급미재체지지적조건하,재생물반응기내능구실현UCB-HSCs화UCB-MSCs적동시확증여수획.
