南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
7期
802-805
,共4页
胡炜%付强%朱平川%杨丽%刘振方%张明
鬍煒%付彊%硃平川%楊麗%劉振方%張明
호위%부강%주평천%양려%류진방%장명
胶内酶解%质谱鉴定%成功率%肽段覆盖率
膠內酶解%質譜鑒定%成功率%肽段覆蓋率
효내매해%질보감정%성공솔%태단복개솔
[目的]提高蛋白质胶内酶解效率,减少萃取过程中肽段的损失,增加质谱鉴定的成功率.[方法]在常规胶内酶解方法的基础上,优化脱色、酶解、萃取等步骤,包括:用铁氰化钾和硫代硫酸钠对银染胶块脱色,酶解温度提高至55℃,以40 nmol/1碳酸氢铵作为酶切缓冲液,使用50%乙腈(ACN)水溶液3步萃取；并使用一步法胶内酶解探索快速胶内酶解方法.[结果]使用铁氰化钾和硫代硫酸钠可在短时间内将银染胶块完全脱色,55C温浴可使酶切时间由20 h减少为2h,以40mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,可省去ZipTip脱盐步骤.优化后,质谱鉴定率提高30.0%(绝对值),且能明显高酶切效率,使目标肽段更高丰度地旱现出来.[结论]优化后的胶内酶解法可显著提高蛋白质胶内酶解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率,其中一步法胶内酶解法有效减少了胶内酶解时间和步骤,可用于高丰度蛋白质的快速质谱检测.
[目的]提高蛋白質膠內酶解效率,減少萃取過程中肽段的損失,增加質譜鑒定的成功率.[方法]在常規膠內酶解方法的基礎上,優化脫色、酶解、萃取等步驟,包括:用鐵氰化鉀和硫代硫痠鈉對銀染膠塊脫色,酶解溫度提高至55℃,以40 nmol/1碳痠氫銨作為酶切緩遲液,使用50%乙腈(ACN)水溶液3步萃取；併使用一步法膠內酶解探索快速膠內酶解方法.[結果]使用鐵氰化鉀和硫代硫痠鈉可在短時間內將銀染膠塊完全脫色,55C溫浴可使酶切時間由20 h減少為2h,以40mmol/L碳痠氫銨作為酶切緩遲液,可省去ZipTip脫鹽步驟.優化後,質譜鑒定率提高30.0%(絕對值),且能明顯高酶切效率,使目標肽段更高豐度地旱現齣來.[結論]優化後的膠內酶解法可顯著提高蛋白質膠內酶解的質譜鑒定成功率和肽段覆蓋率,其中一步法膠內酶解法有效減少瞭膠內酶解時間和步驟,可用于高豐度蛋白質的快速質譜檢測.
[목적]제고단백질효내매해효솔,감소췌취과정중태단적손실,증가질보감정적성공솔.[방법]재상규효내매해방법적기출상,우화탈색、매해、췌취등보취,포괄:용철청화갑화류대류산납대은염효괴탈색,매해온도제고지55℃,이40 nmol/1탄산경안작위매절완충액,사용50%을정(ACN)수용액3보췌취；병사용일보법효내매해탐색쾌속효내매해방법.[결과]사용철청화갑화류대류산납가재단시간내장은염효괴완전탈색,55C온욕가사매절시간유20 h감소위2h,이40mmol/L탄산경안작위매절완충액,가성거ZipTip탈염보취.우화후,질보감정솔제고30.0%(절대치),차능명현고매절효솔,사목표태단경고봉도지한현출래.[결론]우화후적효내매해법가현저제고단백질효내매해적질보감정성공솔화태단복개솔,기중일보법효내매해법유효감소료효내매해시간화보취,가용우고봉도단백질적쾌속질보검측.
