解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2012年
2期
151-153,158
,共4页
沈涛%史立伟%杨礼庆%巴根%梁爽%付勤
瀋濤%史立偉%楊禮慶%巴根%樑爽%付勤
침도%사립위%양례경%파근%량상%부근
Vinexin%原核表达%融合蛋白
Vinexin%原覈錶達%融閤蛋白
Vinexin%원핵표체%융합단백
目的 构建GST-hVinexin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出hVinexin基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hVinexin,并转化E.coli DH5 α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.结果 电泳后酶切结果证实hVinexin大小为990bp,测序证明成功构建了原核表达质粒GST-hVinexin,并诱导表达GST-hVinexin融合蛋白,进一步用Western blot方法验证了其融合蛋白的表达.结论 成功构建了GST-hVinexin原核表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌表达,为进一步纯化Vinexin及研究其结构与功能提供了前提基础.
目的 構建GST-hVinexin融閤蛋白錶達載體,併在大腸埃希菌(E.coli)中誘導錶達.方法 從COS-7細胞中提取mRNA,反轉錄為cDNA.用PCR方法擴增齣hVinexin基因全長,通過BamHI和SalI酶切位點將其定嚮插入pGEX-4T-2載體中,構建原覈錶達質粒pGEX-4T-2-hVinexin,併轉化E.coli DH5 α,通過限製性內切酶酶切電泳和DNA測序鑒定正確後,轉入E.coli BL21中,經異丙基硫代β-D半乳糖苷大量誘導錶達,SDS-PAGE電泳和Western blot鑒定.結果 電泳後酶切結果證實hVinexin大小為990bp,測序證明成功構建瞭原覈錶達質粒GST-hVinexin,併誘導錶達GST-hVinexin融閤蛋白,進一步用Western blot方法驗證瞭其融閤蛋白的錶達.結論 成功構建瞭GST-hVinexin原覈錶達載體,併在原覈細胞大腸埃希菌錶達,為進一步純化Vinexin及研究其結構與功能提供瞭前提基礎.
목적 구건GST-hVinexin융합단백표체재체,병재대장애희균(E.coli)중유도표체.방법 종COS-7세포중제취mRNA,반전록위cDNA.용PCR방법확증출hVinexin기인전장,통과BamHI화SalI매절위점장기정향삽입pGEX-4T-2재체중,구건원핵표체질립pGEX-4T-2-hVinexin,병전화E.coli DH5 α,통과한제성내절매매절전영화DNA측서감정정학후,전입E.coli BL21중,경이병기류대β-D반유당감대량유도표체,SDS-PAGE전영화Western blot감정.결과 전영후매절결과증실hVinexin대소위990bp,측서증명성공구건료원핵표체질립GST-hVinexin,병유도표체GST-hVinexin융합단백,진일보용Western blot방법험증료기융합단백적표체.결론 성공구건료GST-hVinexin원핵표체재체,병재원핵세포대장애희균표체,위진일보순화Vinexin급연구기결구여공능제공료전제기출.
