中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2007年
3期
213-217
,共5页
汤晓燕%程浩%陈贤祯%张行%丁佳逸%叶俊%朱可建%岑建萍%陈萍
湯曉燕%程浩%陳賢禎%張行%丁佳逸%葉俊%硃可建%岑建萍%陳萍
탕효연%정호%진현정%장행%정가일%협준%주가건%잠건평%진평
人乳头状瘤病毒%6bE7%基因沉默%小干扰RNA%尖锐湿疣
人乳頭狀瘤病毒%6bE7%基因沉默%小榦擾RNA%尖銳濕疣
인유두상류병독%6bE7%기인침묵%소간우RNA%첨예습우
目的 研究靶向人乳头状瘤病毒HPV-6b型E7基因的二聚体小干扰RNA(siRNA-HPV-6bE7)对靶基因表达的沉默作用.方法 建立并筛选稳定表达HPV-6bE7基因的B16和293T转染细胞株,用脂质体转染法将体外合成的siRNA-HPV-6bE7转染上述细胞株,采用实时荧光定量PCR分析靶基因HPV-6bE7的mRNA表达情况.结果 用不同浓度的siRNA-HPV-6bE7转染细胞48 h,50nmol/L浓度对B16细胞中靶基因表达的抑制作用最强(抑制率87.05%),1 nmol/L抑制作用较低(9.14%);而在293T细胞,10 nmol/L的siRNA对靶基因表达的抑制效应最大(78.87%),1 nmol/L仍有一定抑制作用(46.92%).50 nmol/L siRNA-HPV-6bE7转染B16细胞后,靶基因的mRNA表达在24 h内开始受抑制(32.47%),48 h作用最强(74.72%),96 h作用很低(8.91%);25 nmol/L和10 nmol/L的siRNA转染293T细胞后,均在24 h内起效(26.66%、20.31%),抑制作用至少能维持72 h(65.93%、35.23%).结论 siRNA-HPV-6bE7对B16和293T细胞外源性靶基因表达均有较强的特异性沉默作用,在不同细胞株达到最大抑制效应的siRNA浓度不同,但时效曲线的变化趋势基本一致,siRNA均在24 h内起效,48～72 h达到高峰,抑制作用至少能维持72 h.本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据.
目的 研究靶嚮人乳頭狀瘤病毒HPV-6b型E7基因的二聚體小榦擾RNA(siRNA-HPV-6bE7)對靶基因錶達的沉默作用.方法 建立併篩選穩定錶達HPV-6bE7基因的B16和293T轉染細胞株,用脂質體轉染法將體外閤成的siRNA-HPV-6bE7轉染上述細胞株,採用實時熒光定量PCR分析靶基因HPV-6bE7的mRNA錶達情況.結果 用不同濃度的siRNA-HPV-6bE7轉染細胞48 h,50nmol/L濃度對B16細胞中靶基因錶達的抑製作用最彊(抑製率87.05%),1 nmol/L抑製作用較低(9.14%);而在293T細胞,10 nmol/L的siRNA對靶基因錶達的抑製效應最大(78.87%),1 nmol/L仍有一定抑製作用(46.92%).50 nmol/L siRNA-HPV-6bE7轉染B16細胞後,靶基因的mRNA錶達在24 h內開始受抑製(32.47%),48 h作用最彊(74.72%),96 h作用很低(8.91%);25 nmol/L和10 nmol/L的siRNA轉染293T細胞後,均在24 h內起效(26.66%、20.31%),抑製作用至少能維持72 h(65.93%、35.23%).結論 siRNA-HPV-6bE7對B16和293T細胞外源性靶基因錶達均有較彊的特異性沉默作用,在不同細胞株達到最大抑製效應的siRNA濃度不同,但時效麯線的變化趨勢基本一緻,siRNA均在24 h內起效,48～72 h達到高峰,抑製作用至少能維持72 h.本研究結果為下一步在動物或臨床進行siRNA榦擾試驗提供瞭實驗依據.
목적 연구파향인유두상류병독HPV-6b형E7기인적이취체소간우RNA(siRNA-HPV-6bE7)대파기인표체적침묵작용.방법 건립병사선은정표체HPV-6bE7기인적B16화293T전염세포주,용지질체전염법장체외합성적siRNA-HPV-6bE7전염상술세포주,채용실시형광정량PCR분석파기인HPV-6bE7적mRNA표체정황.결과 용불동농도적siRNA-HPV-6bE7전염세포48 h,50nmol/L농도대B16세포중파기인표체적억제작용최강(억제솔87.05%),1 nmol/L억제작용교저(9.14%);이재293T세포,10 nmol/L적siRNA대파기인표체적억제효응최대(78.87%),1 nmol/L잉유일정억제작용(46.92%).50 nmol/L siRNA-HPV-6bE7전염B16세포후,파기인적mRNA표체재24 h내개시수억제(32.47%),48 h작용최강(74.72%),96 h작용흔저(8.91%);25 nmol/L화10 nmol/L적siRNA전염293T세포후,균재24 h내기효(26.66%、20.31%),억제작용지소능유지72 h(65.93%、35.23%).결론 siRNA-HPV-6bE7대B16화293T세포외원성파기인표체균유교강적특이성침묵작용,재불동세포주체도최대억제효응적siRNA농도불동,단시효곡선적변화추세기본일치,siRNA균재24 h내기효,48～72 h체도고봉,억제작용지소능유지72 h.본연구결과위하일보재동물혹림상진행siRNA간우시험제공료실험의거.
