中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2003年
3期
294-296
,共3页
马红霞%邓旭明%阎继业%张英霞%欧阳红生
馬紅霞%鄧旭明%閻繼業%張英霞%歐暘紅生
마홍하%산욱명%염계업%장영하%구양홍생
大肠杆菌%AcrA基因%克隆%原核表达
大腸桿菌%AcrA基因%剋隆%原覈錶達
대장간균%AcrA기인%극륭%원핵표체
从大肠杆菌AcrA的编码序列中设计引物,以大肠杆菌基因组为模板,扩增出AcrA基因中约691 bp的cDNA片段,将所得片段与pMD-18T载体连接,转化到DH5a大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道一致.从阳性克隆中提取质粒,经HindⅢ和BamH I酶解,回收691 bp的目的片段,定向克隆到pET-28a表达载体中,提取质粒,再次转化到BL21(DE3)中,成功地筛选出阳性克隆.经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出AcrA部分基因的表达.
從大腸桿菌AcrA的編碼序列中設計引物,以大腸桿菌基因組為模闆,擴增齣AcrA基因中約691 bp的cDNA片段,將所得片段與pMD-18T載體連接,轉化到DH5a大腸桿菌中,成功地篩選到暘性剋隆,其質粒測序結果與文獻報道一緻.從暘性剋隆中提取質粒,經HindⅢ和BamH I酶解,迴收691 bp的目的片段,定嚮剋隆到pET-28a錶達載體中,提取質粒,再次轉化到BL21(DE3)中,成功地篩選齣暘性剋隆.經IPTG誘導暘性菌,通過SDS-PAGE檢測齣AcrA部分基因的錶達.
종대장간균AcrA적편마서렬중설계인물,이대장간균기인조위모판,확증출AcrA기인중약691 bp적cDNA편단,장소득편단여pMD-18T재체련접,전화도DH5a대장간균중,성공지사선도양성극륭,기질립측서결과여문헌보도일치.종양성극륭중제취질립,경HindⅢ화BamH I매해,회수691 bp적목적편단,정향극륭도pET-28a표체재체중,제취질립,재차전화도BL21(DE3)중,성공지사선출양성극륭.경IPTG유도양성균,통과SDS-PAGE검측출AcrA부분기인적표체.
