军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2003年
5期
360-362
,共3页
陈唯军%陈香蕊%牛东升%张雪颖%陈梅玲%魏文进%温博海
陳唯軍%陳香蕊%牛東升%張雪穎%陳梅玲%魏文進%溫博海
진유군%진향예%우동승%장설영%진매령%위문진%온박해
恙虫病东方体Karp株%56?000基因%基因表达%Western-blotting%序列分析
恙蟲病東方體Karp株%56?000基因%基因錶達%Western-blotting%序列分析
양충병동방체Karp주%56?000기인%기인표체%Western-blotting%서렬분석
目的:表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)Karp株56?000表面蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性.方法:采用PCR方法,从Ot.Karp株菌种基因组DNA中扩增出56 000成熟蛋白基因片段,将该片段克隆于原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30/56,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测目的蛋白的表达.结果:(1)获得长约1 500 bp的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因;(2)SDS-PAGE电泳和免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子质量约为56?000的独特蛋白带;(3)表达后菌体超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在;(4)重组表达质粒序列分析结果显示,pQE30/56中插入的基因片段的序列与已报道的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因序列基本一致.结论:获得了Ot.Karp 56 000蛋白基因,并在大肠杆菌中实现了表达,表达的重组蛋白具有免疫反应性.
目的:錶達恙蟲病東方體(Orientia tsutsugamushi)Karp株56?000錶麵蛋白,探索其作為診斷抗原的可能性.方法:採用PCR方法,從Ot.Karp株菌種基因組DNA中擴增齣56 000成熟蛋白基因片段,將該片段剋隆于原覈錶達載體pQE30,構建重組質粒pQE30/56,轉化大腸桿菌,經IPTG誘導錶達、SDS-PAGE電泳和免疫印跡檢測目的蛋白的錶達.結果:(1)穫得長約1 500 bp的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因;(2)SDS-PAGE電泳和免疫印跡顯示該重組質粒轉化的大腸桿菌有一相對分子質量約為56?000的獨特蛋白帶;(3)錶達後菌體超聲破碎後,目的蛋白主要以包涵體形式存在;(4)重組錶達質粒序列分析結果顯示,pQE30/56中插入的基因片段的序列與已報道的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因序列基本一緻.結論:穫得瞭Ot.Karp 56 000蛋白基因,併在大腸桿菌中實現瞭錶達,錶達的重組蛋白具有免疫反應性.
목적:표체양충병동방체(Orientia tsutsugamushi)Karp주56?000표면단백,탐색기작위진단항원적가능성.방법:채용PCR방법,종Ot.Karp주균충기인조DNA중확증출56 000성숙단백기인편단,장해편단극륭우원핵표체재체pQE30,구건중조질립pQE30/56,전화대장간균,경IPTG유도표체、SDS-PAGE전영화면역인적검측목적단백적표체.결과:(1)획득장약1 500 bp적Ot. Karp주56 000외막단백기인;(2)SDS-PAGE전영화면역인적현시해중조질립전화적대장간균유일상대분자질량약위56?000적독특단백대;(3)표체후균체초성파쇄후,목적단백주요이포함체형식존재;(4)중조표체질립서렬분석결과현시,pQE30/56중삽입적기인편단적서렬여이보도적Ot. Karp주56 000외막단백기인서렬기본일치.결론:획득료Ot.Karp 56 000단백기인,병재대장간균중실현료표체,표체적중조단백구유면역반응성.
