浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2006年
3期
270-275
,共6页
刘士旺%郭泽建%蒋冬花%王政逸
劉士旺%郭澤建%蔣鼕花%王政逸
류사왕%곽택건%장동화%왕정일
CryK13V基因%绿色木霉%原生质体转化
CryK13V基因%綠色木黴%原生質體轉化
CryK13V기인%록색목매%원생질체전화
将Cry基因的13位赖氨酸(K)突变成缬氨酸(V)的突变基因CryK13V,构建于pCSN43载体,完成绿色木霉转化载体pCSNTCCm的构建.在研究绿色木霉(Trichoderma viride)原生质体形成和再生基础上,初步研究了绿色木霉转化条件.结果表明,绿色木霉原生质体形成的合适条件为:pH 6.98磷酸盐缓冲液加入4 mg·mL-1glucanex,培养24 h的菌丝,40 r·min-1振荡条件下30℃酶解4 h,原生质体产量达到4.7×107个·mg-1.原生质体在0.3 mol·L-1肌醇和0.3 mol·L-1KCl的CM培养基上再生率为14.5%.用限制酶XhoⅠ介导将带有潮霉素抗性标记的CryK13V基因转化到绿色木霉中,转化率为每微克DNA得到1～2个转化子,转化子稳定性和PCR鉴定结果表明,外源基因已转入受体菌绿色木霉中.
將Cry基因的13位賴氨痠(K)突變成纈氨痠(V)的突變基因CryK13V,構建于pCSN43載體,完成綠色木黴轉化載體pCSNTCCm的構建.在研究綠色木黴(Trichoderma viride)原生質體形成和再生基礎上,初步研究瞭綠色木黴轉化條件.結果錶明,綠色木黴原生質體形成的閤適條件為:pH 6.98燐痠鹽緩遲液加入4 mg·mL-1glucanex,培養24 h的菌絲,40 r·min-1振盪條件下30℃酶解4 h,原生質體產量達到4.7×107箇·mg-1.原生質體在0.3 mol·L-1肌醇和0.3 mol·L-1KCl的CM培養基上再生率為14.5%.用限製酶XhoⅠ介導將帶有潮黴素抗性標記的CryK13V基因轉化到綠色木黴中,轉化率為每微剋DNA得到1～2箇轉化子,轉化子穩定性和PCR鑒定結果錶明,外源基因已轉入受體菌綠色木黴中.
장Cry기인적13위뢰안산(K)돌변성힐안산(V)적돌변기인CryK13V,구건우pCSN43재체,완성록색목매전화재체pCSNTCCm적구건.재연구록색목매(Trichoderma viride)원생질체형성화재생기출상,초보연구료록색목매전화조건.결과표명,록색목매원생질체형성적합괄조건위:pH 6.98린산염완충액가입4 mg·mL-1glucanex,배양24 h적균사,40 r·min-1진탕조건하30℃매해4 h,원생질체산량체도4.7×107개·mg-1.원생질체재0.3 mol·L-1기순화0.3 mol·L-1KCl적CM배양기상재생솔위14.5%.용한제매XhoⅠ개도장대유조매소항성표기적CryK13V기인전화도록색목매중,전화솔위매미극DNA득도1～2개전화자,전화자은정성화PCR감정결과표명,외원기인이전입수체균록색목매중.
