中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2007年
10期
1118-1122
,共5页
段智霞%郑启新%郭晓东%袁泉%陈顺广
段智霞%鄭啟新%郭曉東%袁泉%陳順廣
단지하%정계신%곽효동%원천%진순엄
骨形成蛋白2活性多肽%骨髓间充质干细胞%成骨诱导%剂量依赖性
骨形成蛋白2活性多肽%骨髓間充質榦細胞%成骨誘導%劑量依賴性
골형성단백2활성다태%골수간충질간세포%성골유도%제량의뢰성
目的 探讨自行合成的骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)活性多肽对大鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)体外定向诱导成骨的能力,评价BMP-2活性多肽的成骨诱导性及诱导成骨的剂量依赖性.方法 取4周龄Wistar大鼠分离培养MSCs,传至第3代时改用条件培养基,培养基中分别加入浓度为300、200、100、50及0 μg/m1的BMP-2活性多肽,并依次记为A、B、C、D和E组.细胞培养至5、10、15及20 d,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,测定钙含量,采用实时荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测Ⅰ型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达,检测不同浓度BMP-2活性多肽体外诱导成骨的能力.结果 倒置相差显微镜下观察,用条件培养基培养3～4 d后,培养细胞由长梭形转变为短梭形或多角形.随条件培养基中BMP-2活性多肽浓度的增加,细胞发生成骨样改变的时间提前.ALP活性和钙含量检测显示,A组和B组较其他组增加明显,且差异有统计学意义(P＜0.05),但A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).FQ-PCR检测发现不同浓度条件培养基培养14 d后,Ⅰ型胶原、OPN和OCN mRNA在各组均有表达.Ct值表明其表达量的大小顺序为A、B、C、D组,E组无表达,A组和B组的Ct值明显大于C组和D组,差异有统计学意义(P＜0.05),但A组和B组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMP-2活性多肽能有效地促进MSCs向成骨方向分化,其诱导作用存在剂量依赖关系,最佳诱导剂量为200 μg/ml.
目的 探討自行閤成的骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)活性多肽對大鼠骨髓間充質榦細胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)體外定嚮誘導成骨的能力,評價BMP-2活性多肽的成骨誘導性及誘導成骨的劑量依賴性.方法 取4週齡Wistar大鼠分離培養MSCs,傳至第3代時改用條件培養基,培養基中分彆加入濃度為300、200、100、50及0 μg/m1的BMP-2活性多肽,併依次記為A、B、C、D和E組.細胞培養至5、10、15及20 d,檢測堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,測定鈣含量,採用實時熒光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)檢測Ⅰ型膠原、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)及骨鈣素(osteocalcin,OCN)mRNA的錶達,檢測不同濃度BMP-2活性多肽體外誘導成骨的能力.結果 倒置相差顯微鏡下觀察,用條件培養基培養3～4 d後,培養細胞由長梭形轉變為短梭形或多角形.隨條件培養基中BMP-2活性多肽濃度的增加,細胞髮生成骨樣改變的時間提前.ALP活性和鈣含量檢測顯示,A組和B組較其他組增加明顯,且差異有統計學意義(P＜0.05),但A、B組間比較差異無統計學意義(P＞0.05).FQ-PCR檢測髮現不同濃度條件培養基培養14 d後,Ⅰ型膠原、OPN和OCN mRNA在各組均有錶達.Ct值錶明其錶達量的大小順序為A、B、C、D組,E組無錶達,A組和B組的Ct值明顯大于C組和D組,差異有統計學意義(P＜0.05),但A組和B組之間差異無統計學意義(P＞0.05).結論 BMP-2活性多肽能有效地促進MSCs嚮成骨方嚮分化,其誘導作用存在劑量依賴關繫,最佳誘導劑量為200 μg/ml.
목적 탐토자행합성적골형성단백2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)활성다태대대서골수간충질간세포(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)체외정향유도성골적능력,평개BMP-2활성다태적성골유도성급유도성골적제량의뢰성.방법 취4주령Wistar대서분리배양MSCs,전지제3대시개용조건배양기,배양기중분별가입농도위300、200、100、50급0 μg/m1적BMP-2활성다태,병의차기위A、B、C、D화E조.세포배양지5、10、15급20 d,검측감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)활성,측정개함량,채용실시형광정량PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)검측Ⅰ형효원、골교단백(osteopontin,OPN)급골개소(osteocalcin,OCN)mRNA적표체,검측불동농도BMP-2활성다태체외유도성골적능력.결과 도치상차현미경하관찰,용조건배양기배양3～4 d후,배양세포유장사형전변위단사형혹다각형.수조건배양기중BMP-2활성다태농도적증가,세포발생성골양개변적시간제전.ALP활성화개함량검측현시,A조화B조교기타조증가명현,차차이유통계학의의(P＜0.05),단A、B조간비교차이무통계학의의(P＞0.05).FQ-PCR검측발현불동농도조건배양기배양14 d후,Ⅰ형효원、OPN화OCN mRNA재각조균유표체.Ct치표명기표체량적대소순서위A、B、C、D조,E조무표체,A조화B조적Ct치명현대우C조화D조,차이유통계학의의(P＜0.05),단A조화B조지간차이무통계학의의(P＞0.05).결론 BMP-2활성다태능유효지촉진MSCs향성골방향분화,기유도작용존재제량의뢰관계,최가유도제량위200 μg/ml.
