中国农业科学
中國農業科學
중국농업과학
SCIENTIA AGRICULTURA SINICA
2008年
2期
587-592
,共6页
王方昆%袁秀芳%王一成%张存%徐丽华%刘思当
王方昆%袁秀芳%王一成%張存%徐麗華%劉思噹
왕방곤%원수방%왕일성%장존%서려화%류사당
猪流感病毒%NS1基因%反应原性
豬流感病毒%NS1基因%反應原性
저류감병독%NS1기인%반응원성
[目的] 对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein 1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的 ELISA试剂盒的研制奠定基础.[方法] 采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NSl基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)上构建成重组质粒pET-NS1,转化受体菌E. coli BL21-DE3感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出正确重组质粒转化子.[结果] 经终浓度5 mmo1.L-1乳糖诱导,SDS-PAGE 电泳结果显示,重组蛋白NSl得到大量表达,分子质量约为26kD.经Western-blotting分析,表达蛋白能与阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应;ELISA检测显示,在被检血清稀释1 280倍时,阳性血清的OD650 值大约是阴性血清的3倍,差异明显. [结论] 重组蛋白BS1表达量高,易于纯化并且具有良好的血清学反应的特异性.
[目的] 對H9N2亞型豬流感病毒NS1(nonstructural protein 1)基因進行原覈錶達,穫得純化錶達產物,以期為檢測豬流感抗體的 ELISA試劑盒的研製奠定基礎.[方法] 採用RT-PCR擴增瞭豬流感病毒(H9N2)的NSl基因,將其剋隆于錶達載體pET-28a(+)上構建成重組質粒pET-NS1,轉化受體菌E. coli BL21-DE3感受態細胞,經酶切鑒定及序列分析,篩選齣正確重組質粒轉化子.[結果] 經終濃度5 mmo1.L-1乳糖誘導,SDS-PAGE 電泳結果顯示,重組蛋白NSl得到大量錶達,分子質量約為26kD.經Western-blotting分析,錶達蛋白能與暘性血清髮生特異性反應,而與陰性血清不反應;ELISA檢測顯示,在被檢血清稀釋1 280倍時,暘性血清的OD650 值大約是陰性血清的3倍,差異明顯. [結論] 重組蛋白BS1錶達量高,易于純化併且具有良好的血清學反應的特異性.
[목적] 대H9N2아형저류감병독NS1(nonstructural protein 1)기인진행원핵표체,획득순화표체산물,이기위검측저류감항체적 ELISA시제합적연제전정기출.[방법] 채용RT-PCR확증료저류감병독(H9N2)적NSl기인,장기극륭우표체재체pET-28a(+)상구건성중조질립pET-NS1,전화수체균E. coli BL21-DE3감수태세포,경매절감정급서렬분석,사선출정학중조질립전화자.[결과] 경종농도5 mmo1.L-1유당유도,SDS-PAGE 전영결과현시,중조단백NSl득도대량표체,분자질량약위26kD.경Western-blotting분석,표체단백능여양성혈청발생특이성반응,이여음성혈청불반응;ELISA검측현시,재피검혈청희석1 280배시,양성혈청적OD650 치대약시음성혈청적3배,차이명현. [결론] 중조단백BS1표체량고,역우순화병차구유량호적혈청학반응적특이성.
